CHO HCP ELISA કિટ
આ પરીક્ષામાં વન-સ્ટેપ ઇમ્યુનોસોર્બન્ટ ELISA પદ્ધતિનો ઉપયોગ કરવામાં આવે છે.CHOK1 HCP ધરાવતા નમૂનાઓ વારાફરતી HRP-લેબલવાળી બકરી વિરોધી CHOK1 એન્ટિબોડી અને ELISA પ્લેટ પર કોટેડ એન્ટિ-CHOK1 એન્ટિબોડી સાથે પ્રતિક્રિયા આપે છે, અંતે સોલિડ-ફેઝ એન્ટિબોડી-HCP-લેબલ એન્ટિબોડીનું સેન્ડવિચ સંકુલ બનાવે છે.ELISA પ્લેટને ધોઈને અનબાઉન્ડ એન્ટિજેન-એન્ટિબોડી દૂર કરી શકાય છે.ટીએમબી સબસ્ટ્રેટને પૂરતી પ્રતિક્રિયા માટે કૂવામાં ઉમેરવામાં આવે છે.સ્ટોપ સોલ્યુશન ઉમેર્યા પછી કલર ડેવલપમેન્ટ બંધ થઈ જાય છે અને 450/650nm પર રિએક્શન સોલ્યુશનનું OD અથવા શોષક મૂલ્ય માઇક્રોપ્લેટ રીડર વડે વાંચવામાં આવે છે.OD મૂલ્ય અથવા શોષક મૂલ્ય એ ઉકેલમાં HCP સામગ્રીના પ્રમાણસર છે.આના પરથી, દ્રાવણમાં HCP સાંદ્રતા પ્રમાણભૂત વળાંક અનુસાર ગણતરી કરી શકાય છે.
અરજી
આ કીટનો ઉપયોગ નમૂનાઓમાં CHOK1 હોસ્ટ સેલ પ્રોટીન અવશેષોની સામગ્રીને માત્રાત્મક રીતે શોધવા માટે થાય છે.
Cઘટકો
| S/N | ઘટક | એકાગ્રતા | સંગ્રહ શરતો |
| 1 | CHOK1 HCP ધોરણ | 0.5mg/mL | ≤–20℃ |
| 2 | વિરોધી CHO HCP-HRP | 0.5mg/mL | ≤–20℃, પ્રકાશથી બચાવો |
| 3 | ટીએમબી | NA | 2-8℃, પ્રકાશથી રક્ષણ કરો |
| 4 | 20 × PBST 0.05% | NA | 2-8℃ |
| 5 | ઉકેલ રોકો | NA | RT |
| 6 | માઇક્રોપ્લેટ સીલર્સ | NA | RT |
| 7 | BSA | NA | 2-8℃ |
| 8 | ઉચ્ચ શોષણ પૂર્વ-કોટિંગ પ્લેટો | NA | 2-8℃ |
સાધનો જરૂરી
| ઉપભોક્તા / સાધનો | ઉત્પાદન | કેટલોગ |
| માઇક્રોપ્લેટ રીડર | મોલેક્યુલર ઉપકરણો | સ્પેક્ટ્રા મેક્સ M5, M5e અથવા સમકક્ષ |
| થર્મોમિક્સર | એપેન્ડોર્ફ | Eppendorf/5355, અથવા સમકક્ષ |
| વોર્ટેક્સ મિક્સર | IKA | MS3 ડિજિટલ, અથવા સમકક્ષ |
સંગ્રહ અને સ્થિરતા
1.-25~-15°C પર પરિવહન.
2.સંગ્રહની સ્થિતિ કોષ્ટક 1 માં બતાવ્યા પ્રમાણે છે;ઘટકો 1-2 સંગ્રહિત થાય છે ≤–20°C,5-6 સંગ્રહિત થાય છે RT,3、4、7、8 2-8℃ પર સંગ્રહિત થાય છે;માન્યતા અવધિ 12 મહિના છે.
ઉત્પાદન પરિમાણો
1.સંવેદનશીલતા: 1ng/mL
2.શોધ શ્રેણી: 3- 100ng/mL
3.ચોકસાઇ: ઇન્ટ્રા-એસે CV≤ 10%, ઇન્ટર-એસે CV≤ 15%
4.HCP કવરેજ: >80%
5.વિશિષ્ટતા: આ કીટ સાર્વત્રિક છે કારણ કે તે શુદ્ધિકરણ પ્રક્રિયાથી સ્વતંત્ર CHOK1 HCP સાથે વિશિષ્ટ રીતે પ્રતિક્રિયા આપે છે.
રીએજન્ટ તૈયારી
1.PBST 0.05%
20×PBST 0.05% નું 15 મિલી લો, ડીડીએચમાં પાતળું કરો2ઓ, અને 300 મિલી સુધી બને છે.
2.1.0% BSA
બોટલમાંથી 1 ગ્રામ BSA લો અને PBST 0.05% ના 100 મિલીલીટરમાં પાતળું કરો, સંપૂર્ણપણે ઓગળી જાય ત્યાં સુધી સારી રીતે ભળી દો અને 2-8 ડિગ્રી સેલ્સિયસ પર સ્ટોર કરો.તૈયાર કરેલ મંદન બફર 7 દિવસ માટે માન્ય છે.તે જરૂરી તરીકે તૈયાર કરવાની ભલામણ કરવામાં આવે છે.
3.શોધ ઉકેલ 2μg/mL
0.5 mg/mL Anti-CHO HCP-HRP નું 48μL લો અને 2μg/mL શોધ ઉકેલની અંતિમ સાંદ્રતા મેળવવા માટે 1% BSA ના 11,952μL માં પાતળું કરો.
4.QC અને CHOK1 HCP ધોરણોની તૈયારી
| ટ્યુબ ના. | મૂળ | એકાગ્રતા | વોલ્યુમ | 1% BSA | કુલ વોલ્યુમ | અંતિમ |
| A | ધોરણ | 0.5mg/mL | 10 | 490 | 500 | 10,000 |
| B | A | 10,000 | 50 | 450 | 500 | 1,000 |
| S1 | B | 1.000 | 50 | 450 | 500 | 100 |
| S2 | S1 | 100 | 300 | 100 | 400 | 75 |
| S3 | S2 | 75 | 200 | 175 | 375 | 40 |
| S4 | S3 | 40 | 150 | 350 | 500 | 12 |
| S5 | S4 | 12 | 200 | 200 | 400 | 6 |
| S6 | S5 | 6 | 200 | 200 | 400 | 3 |
| NC | NA | NA | NA | 200 | 200 | 0 |
| QC | S1 | 100 | 50 | 200 | 250 | 20 |
કોષ્ટક: QC અને ધોરણોની તૈયારી
પરીક્ષા પ્રક્રિયા
1.ઉપર "રીએજન્ટ તૈયારી" માં દર્શાવેલ રીએજન્ટ્સ તૈયાર કરો.
2.દરેક કૂવામાં 50μL ધોરણો, નમૂનાઓ અને QC (કોષ્ટક 3 નો સંદર્ભ લો) લો, પછી 100μL ડિટેક્શન સોલ્યુશન ઉમેરો (2μg/mL);પ્લેટને સીલરથી ઢાંકી દો અને ELISA પ્લેટને થર્મોમિક્સર પર મૂકો.500rpm, 25±3℃ પર 2 કલાક માટે સેવન કરો.
3.સિંકમાં માઇક્રોપ્લેટને ઊંધી કરો અને કોટિંગ સોલ્યુશન કાઢી નાખો.દરેક કૂવામાં PBST 0.05% નું 300μL પીપેટ કરો અને ELISA પ્લેટને ધોવા અને સોલ્યુશન કાઢી નાખો, અને ધોવાનું 3 વખત પુનરાવર્તન કરો.પ્લેટને સ્વચ્છ કાગળના ટુવાલ પર ઊંધી કરો અને સૂકવી દો.
4.દરેક કૂવામાં TMB સબસ્ટ્રેટનું 100μL (કોષ્ટક 1 જુઓ) ઉમેરો, ELISA પ્લેટને સીલ કરો અને 15 મિનિટ માટે 25±3℃ પર અંધારામાં ઉકાળો.
5.દરેક કૂવામાં 100μL સ્ટોપ સોલ્યુશનનું પીપેટ.
6.માઇક્રોપ્લેટ રીડર વડે 450/650nm ની તરંગલંબાઇ પર શોષણ માપો.
7.SoftMax અથવા સમકક્ષ સોફ્ટવેર દ્વારા ડેટાનું વિશ્લેષણ કરો.ચાર-પેરામીટર લોજિસ્ટિક રીગ્રેસન મોડલનો ઉપયોગ કરીને સ્ટાન્ડર્ડ કર્વ પ્લોટ કરો.
માનક વળાંકનું ઉદાહરણ
નોંધ: જો નમૂનામાં HCP ની સાંદ્રતા પ્રમાણભૂત વળાંકની ઉપરની મર્યાદા કરતાં વધી જાય, તો પરીક્ષણ પહેલાં તેને મંદન બફર સાથે યોગ્ય રીતે પાતળું કરવાની જરૂર છે.
નોંધો
સ્ટોપ સોલ્યુશન 2M સલ્ફ્યુરિક એસિડ છે, કૃપા કરીને સ્પ્લેશિંગ ટાળવા માટે કાળજી સાથે હેન્ડલ કરો!
