DNase I
DNase I (Deoxyribonuclease I) એ એન્ડોડીઓક્સીરીબોન્યુક્લીઝ છે જે સિંગલ- અથવા ડબલ-સ્ટ્રેન્ડેડ ડીએનએને ડાયજેસ્ટ કરી શકે છે.તે 5′-ટર્મિનલ પર ફોસ્ફેટ જૂથો અને 3′-ટર્મિનલ પર હાઇડ્રોક્સિલ સાથે મોનોડિયોક્સિન્યુક્લિયોટાઇડ્સ અથવા સિંગલ- અથવા ડબલ-સ્ટ્રેન્ડેડ ઓલિગોડિઓક્સાઇન્યુક્લિયોટાઇડ્સ ઉત્પન્ન કરવા માટે ફોસ્ફોડિસ્ટર બોન્ડ્સને ઓળખે છે અને તોડી નાખે છે.DNase I ની પ્રવૃત્તિ Ca2+ પર આધાર રાખે છે અને Mn2+ અને Zn2+ જેવા દ્વિભાષી ધાતુના આયનો દ્વારા સક્રિય કરી શકાય છે.5mM Ca2+ એન્ઝાઇમને હાઇડ્રોલિસિસથી રક્ષણ આપે છે.Mg2+ ની હાજરીમાં, એન્ઝાઇમ અવ્યવસ્થિત રીતે ડીએનએના કોઈપણ સ્ટ્રેન્ડ પરની કોઈપણ સાઇટને ઓળખી અને સાફ કરી શકે છે.Mn2+ ની હાજરીમાં, ડીએનએના ડબલ સ્ટ્રેન્ડને એકસાથે ઓળખી શકાય છે અને લગભગ સમાન સાઇટ પર ક્લીવ કરી શકાય છે જેથી સપાટ છેડાના ડીએનએ ટુકડાઓ અથવા 1-2 ન્યુક્લિયોટાઇડ્સ બહાર નીકળેલા સ્ટીકી એન્ડ ડીએનએ ટુકડાઓ રચાય.
ઉત્પાદન મિલકત
બોવાઇન સ્વાદુપિંડ DNase I યીસ્ટ એક્સપ્રેશન સિસ્ટમમાં વ્યક્ત કરવામાં આવ્યું હતું અને શુદ્ધ કરવામાં આવ્યું હતું.
Cઘટકો
| ઘટક | વોલ્યુમ | |||
| 0.1KU | 1KU | 5KU | 50KU | |
| DNase I, RNase મુક્ત | 20μL | 200μL | 1 મિલી | 10 મિલી |
| 10×DNase I બફર | 1 મિલી | 1 મિલી | 5×1mL | 5×10mL |
પરિવહન અને સંગ્રહ
1. સંગ્રહ સ્થિરતા: – સંગ્રહ માટે 15℃~-25℃;
2. પરિવહન સ્થિરતા: બરફના પેક હેઠળ પરિવહન;
3. આમાં સપ્લાય કરેલ: 10 mM Tris-HCl, 2 mM CaCl2, 50% ગ્લિસરોલ, 25℃ પર pH 7.6.
એકમ વ્યાખ્યા
એક એકમને એન્ઝાઇમના જથ્થા તરીકે વ્યાખ્યાયિત કરવામાં આવે છે જે 37°C પર 10 મિનિટમાં 1 µg pBR322 DNAને સંપૂર્ણપણે ડિગ્રેડ કરશે.
ગુણવત્તા નિયંત્રણ
RNase:37 ℃ પર 4 કલાક માટે 1.6 μg MS2 RNA સાથે DNase I નું 5U એગેરોઝ જેલ ઇલેક્ટ્રોફોરેસીસ દ્વારા નિર્ધારિત કોઈ અધોગતિ પેદા કરતું નથી.
બેક્ટેરિયલ એન્ડોટોક્સિન:LAL-પરીક્ષણ, ચાઇનીઝ ફાર્માકોપીયા IV 2020 આવૃત્તિ અનુસાર, જેલ મર્યાદા પરીક્ષણ પદ્ધતિ, સામાન્ય નિયમ (1143).બેક્ટેરિયલ એન્ડોટોક્સિન સામગ્રી ≤10 EU/mg હોવી જોઈએ.
ઉપયોગ માટે સૂચનાઓ
1. નીચે સૂચિબદ્ધ પ્રમાણ અનુસાર RNase-મુક્ત ટ્યુબમાં પ્રતિક્રિયા ઉકેલ તૈયાર કરો:
| ઘટક | વોલ્યુમ |
| આરએનએ | X μg |
| 10 × DNase I બફર | 1 μL |
| DNase I, RNase-ફ્રી(5U/μL) | 1 U પ્રતિ μg RNA |
| ડીડીએચ2O | 10 μL સુધી |
15 મિનિટ માટે 2.37 ℃;
3.પ્રતિક્રિયાને રોકવા માટે સમાપ્તિ બફર ઉમેરો અને DNase I નિષ્ક્રિય કરવા માટે 10 મિનિટ માટે 65℃ પર ગરમ કરો. નમૂનાનો સીધો ઉપયોગ આગામી ટ્રાન્સક્રિપ્શન પ્રયોગ માટે કરી શકાય છે.
નોંધો
1. RNA ના μg દીઠ 1U DNase I નો ઉપયોગ કરો, અથવા RNA ના 1μg કરતા ઓછા માટે 1U DNase I નો ઉપયોગ કરો.
2. એન્ઝાઇમ નિષ્ક્રિયતા દરમિયાન આરએનએને ડિગ્રેજ થવાથી બચાવવા માટે 5 એમએમની અંતિમ સાંદ્રતામાં EDTA ઉમેરવી જોઈએ.
