તાપમાન સંવેદનશીલ UNG
ટેમ્પરેચર સેન્સિટિવ UNG (TS-UNG) એ E. coli માં રિકોમ્બિનન્ટ એક્સપ્રેશન દ્વારા મેળવવામાં આવેલ છે.એન્ઝાઇમ યુરેસીલ-સમાવતી સિંગલ- અને ડબલ-સ્ટ્રેન્ડેડ ડીએનએમાંથી મુક્ત યુરેસિલના પ્રકાશનને ઉત્પ્રેરિત કરે છે અને આરએનએ સામે નિષ્ક્રિય છે.ઇ. કોલી જનીન મૂળના પરંપરાગત UNG એન્ઝાઇમની સરખામણીમાં, TS-UNG એન્ઝાઇમ નીચા તાપમાને (20℃~37℃) વધુ પ્રવૃત્તિ ધરાવે છે અને તે તાપમાન સંવેદનશીલ અને સરળતાથી નિષ્ક્રિય (50℃) છે, જે dUTP ધરાવતા એમ્પ્લીફિકેશનના અધોગતિને ટાળે છે. શેષ પ્રવૃત્તિ દ્વારા ઓરડાના તાપમાને ઉત્પાદનો કે જે પરંપરાગત UNG એન્ઝાઇમના નિષ્ક્રિયકરણ પછી રહી શકે છે.તેથી, TS-UNG એન્ઝાઇમ માત્ર PCR દૂષણ નિવારણ પ્રતિક્રિયા માટે જ યોગ્ય નથી, પરંતુ RT-PCR એમ્પ્લીફિકેશન પ્રોગ્રામ સાથે પણ સારી રીતે મેળ ખાય છે અને RT-PCR દૂષણ નિવારણ પ્રતિક્રિયામાં તેનો ઉપયોગ કરી શકાય છે.
ભલામણ કરેલ એપ્લિકેશન
દૂષણ નિવારણ એમ્પ્લીફિકેશન
સંગ્રહ સ્થિતિ
લાંબા ગાળાના સંગ્રહ માટે -20 ° સે, ઉપયોગ કરતા પહેલા સારી રીતે મિશ્રિત થવું જોઈએ, વારંવાર ફ્રીઝ-થૉ ટાળો.
સંગ્રહ બફર
20 mM Tris-HCl (pH 7.5), 100 mM NaCl, 0.1 mM EDTA, 1 mM DTT, સ્ટેબિલાઇઝર, 50% ગ્લિસરોલ.
એકમ વ્યાખ્યા
37°C પર 1 કલાકમાં dU બેઝ ધરાવતા 1µg સિંગલ-સ્ટ્રેન્ડેડ DNAને ડિગ્રેડ કરવા માટે જરૂરી એન્ઝાઇમની માત્રા 1 એકમ પ્રવૃત્તિ (U) છે.
ગુણવત્તા નિયંત્રણ
1.SDS-PAGE ઇલેક્ટ્રોફોરેટિક શુદ્ધતા 98% થી વધુ
2.અધોગતિ પ્રવૃત્તિ, બેચ-ટુ-બેચ નિયંત્રણ, સ્થિરતા
3.કોઈ એક્સોજેનસ ન્યુક્લિઝ પ્રવૃત્તિ નથી, કોઈ એક્સોજેનસ એન્ડોન્યુક્લિઝ અથવા એક્સોન્યુક્લિઝ દૂષણ નથી.
સૂચનાઓ
| ઘટકો | વોલ્યુમ (μL) | અંતિમ એકાગ્રતા |
| 10 × PCR બફર (dNTP ફ્રી, Mg²+મફત) | 5 | 1× |
| dUTPs (dCTP, dGTP, dATP) | - | 200 μM |
| dUTP (dTTP બદલો) | - | 200-600 μM |
| 25 એમએમ એમજીસીએલ2 | 2-8 μL | 1-4 એમએમ |
| 5 U/μL Taq | 0.25 | 1.25 યુ |
| 1 U/μLTS-UNG | 0.5 (0.1-0.5) | 0.5 U (0.1-0.5U) |
| 25 × પ્રાઈમર મિક્સa | 2 | 1× |
| ઢાંચો | - | ~1μg/પ્રતિક્રિયા |
| ddH₂O | 50 થી | - |
નોંધ: a: જો qPCR/qRT-PCR માટે વપરાય છે, તો પ્રતિક્રિયા સિસ્ટમમાં ફ્લોરોસન્ટ પ્રોબ ઉમેરવી જોઈએ.સામાન્ય રીતે, 0.2 μM ની અંતિમ પ્રાઈમર સાંદ્રતા સારા પરિણામો આપી શકે છે;જ્યારે પ્રતિક્રિયા કામગીરી નબળી હોય છે, ત્યારે પ્રાઈમર સાંદ્રતા 0.2-1 μM ની રેન્જમાં ગોઠવી શકાય છે.સામાન્ય રીતે, ચકાસણી સાંદ્રતા 0.1-0.3 μM ની રેન્જમાં ઑપ્ટિમાઇઝ કરવામાં આવે છે.પ્રાઈમર અને પ્રોબના શ્રેષ્ઠ સંયોજનને શોધવા માટે એકાગ્રતા ઢાળના પ્રયોગો કરી શકાય છે.
નોંધો
1.TS-UNG એન્ઝાઇમનું શ્રેષ્ઠ પ્રતિક્રિયા તાપમાન પ્રમાણમાં ઓછું છે, અને તેને 20℃~37℃ની રેન્જમાં ઑપ્ટિમાઇઝ કરી શકાય છે, એન્ઝાઇમની માત્રા અને પ્રતિક્રિયા સમય 0.1~0.5 U, 5~ ની રેન્જમાં ઑપ્ટિમાઇઝ કરી શકાય છે. 10 મિનિટ;અને એન્ઝાઇમ રિવર્સ ટ્રાન્સક્રિપ્શનની પ્રક્રિયામાં નિષ્ક્રિય થઈ શકે છે.
2.દૂષણને રોકવા માટે તે PCR અને RT-PCR માટે યોગ્ય છે.
3.વારંવાર ફ્રીઝ-થૉ ટાળો, અને મોટા તાપમાનની વધઘટનો સંપર્ક કરશો નહીં.
4.એમ્પ્લીફાય કરવા માટેના વિવિધ જનીનોમાં dUTP ની વિવિધ ઉપયોગ કાર્યક્ષમતા અને UNG એન્ઝાઇમ પ્રત્યે સંવેદનશીલતા હોય છે, તેથી, જો UNG સિસ્ટમનો ઉપયોગ તપાસ સંવેદનશીલતામાં ઘટાડો તરફ દોરી જાય છે, તો પ્રતિક્રિયા સિસ્ટમને સમાયોજિત અને ઑપ્ટિમાઇઝ કરવી જોઈએ, જો તમને તકનીકી સહાયની જરૂર હોય, તો કૃપા કરીને સંપર્ક કરો. અમારી કંપની.
