DNase I (Rnase ફ્રી)(5u/ul)
કેટ નંબર: HC4007A
DNase I (Deoxyribonuclease I) એ એન્ડોડીઓક્સીરીબોન્યુક્લીઝ છે જે સિંગલ- અથવા ડબલ-સ્ટ્રેન્ડેડ ડીએનએને ડાયજેસ્ટ કરી શકે છે.તે 5'-ટર્મિનલ પર ફોસ્ફેટ જૂથો અને 3'-ટર્મિનલ પર હાઇડ્રોક્સિલ સાથે મોનોડિયોક્સિન્યુક્લિયોટાઇડ્સ અથવા સિંગલ- અથવા ડબલ-સ્ટ્રેન્ડેડ ઓલિગોડિઓક્સાઇન્યુક્લિયોટાઇડ્સ ઉત્પન્ન કરવા માટે ફોસ્ફોડિસ્ટર બોન્ડ્સને ઓળખે છે અને તોડી નાખે છે.DNase I ની પ્રવૃત્તિ Ca પર આધાર રાખે છે2+અને Mn જેવા દ્વિભાષી ધાતુના આયનો દ્વારા સક્રિય કરી શકાય છે2+અને Zn2+.5 એમએમ Ca2+હાઇડ્રોલિસિસથી એન્ઝાઇમનું રક્ષણ કરે છે.એમજીની હાજરીમાં2+, એન્ઝાઇમ અવ્યવસ્થિત રીતે ડીએનએના કોઈપણ સ્ટ્રેન્ડ પરની કોઈપણ સાઇટને ઓળખી અને સાફ કરી શકે છે.Mn ની હાજરીમાં2+, ડીએનએના ડબલ સ્ટ્રેન્ડને એકસાથે ઓળખી શકાય છે અને લગભગ સમાન સાઇટ પર ક્લીવ કરી શકાય છે જેથી ફ્લેટ એન્ડ ડીએનએ ટુકડાઓ અથવા 1-2 ન્યુક્લિયોટાઇડ્સ બહાર નીકળેલા સ્ટીકી એન્ડ ડીએનએ ટુકડાઓ રચાય.
ઘટકો
| નામ | 0.1KU | 1KU | 5 કુ | 50 KU |
| DNase I, RNase મુક્ત | 20μL | 200μL | 1 મિલી | 10 એમએલ |
| 10×DNase I બફર | 1 મિલી | 1 મિલી | 5 × 1 એમએલ | 5 × 10 એમએલ |
સંગ્રહ શરતો
સંગ્રહ માટે -25℃~-15℃;આઇસ પેક હેઠળ પરિવહન.
સૂચનાઓ
1. નીચે સૂચિબદ્ધ પ્રમાણ અનુસાર RNase-મુક્ત ટ્યુબમાં પ્રતિક્રિયા ઉકેલ તૈયાર કરો:
| ઘટક | વોલ્યુમ |
| આરએનએ | X µg |
| 10 × DNase I બફર | 1μL |
| DNase I, RNase-ફ્રી(5U/μL) | 1 U પ્રતિ µg RNA① |
| ડીડીએચ2O | 10μL સુધી |
નોંધ: ① DNase I ના વોલ્યુમની ગણતરી કરો જેને RNA ની માત્રાના આધારે ઉમેરવાની જરૂર છે.
2. 15 મિનિટ માટે 37 ℃;
3. 2.5mM~5mMની અંતિમ સાંદ્રતામાં 0.5M EDTA ઉમેરો અને પ્રતિક્રિયા રોકવા માટે 10 મિનિટ માટે 65℃ પર ગરમ કરો.નમૂનાનો સીધો ઉપયોગ આગળની પ્રતિક્રિયા જેમ કે રિવર્સ ટ્રાન્સક્રિપ્શન માટે કરી શકાય છેપ્રયોગ
એકમ વ્યાખ્યા
એક એકમને એન્ઝાઇમના જથ્થા તરીકે વ્યાખ્યાયિત કરવામાં આવે છે જે pBR322 ના 1µgને સંપૂર્ણપણે ડિગ્રેડ કરશે.37 ℃ પર 10 મિનિટમાં DNA.
ગુણવત્તા નિયંત્રણ
RNase:37℃ પર 4 કલાક માટે 1.6µg MS2 RNA સાથે DNase I નું 5U કોઈ અધોગતિ પેદા કરતું નથીએગેરોઝ જેલ ઇલેક્ટ્રોફોરેસીસ દ્વારા નક્કી કરવામાં આવે છે.
નોંધો
1. કૃપા કરીને 0.5MEDTA જાતે તૈયાર કરો.
2. RNA ના µg દીઠ 1U DNase I નો ઉપયોગ કરો.જો કે, જો RNA 1µg કરતા ઓછું હોય, તો કૃપા કરીને 1U DNase I નો ઉપયોગ કરો.
3. ઓપરેશન દરમિયાન એન્ઝાઇમને બરફ પર મૂકો.
