સુપરસ્ટાર્ટ qPCR પ્રીમિક્સ વત્તા-UNG
કેટ નંબર: HCB5071E
સુપરસ્ટાર્ટ qPCR પ્રીમિક્સ પ્લસ-યુએનજી એ વિશિષ્ટ રીએજન્ટ છે જે રીઅલ ટાઇમ પીસીઆર ગુણાત્મક અને માત્રાત્મક પ્રતિક્રિયાઓ માટે પ્રોબ-આધારિત શોધનો ઉપયોગ કરીને રચાયેલ છે, ખાસ કરીને લ્યોફિલાઇઝેશન પ્રક્રિયાઓ માટે વિકસાવવામાં આવી છે.તે એક નવલકથા હોટ-સ્ટાર્ટ એન્ઝાઇમ હોટસ્ટાર્ટ ટાક પ્લસ (ડીજી) ધરાવે છે, જે તેની ટાક એન્ઝાઇમ પ્રવૃત્તિને ઓરડાના તાપમાને સીલ કરે છે, અસરકારક રીતે બિન-વિશિષ્ટ એમ્પ્લીફિકેશનને અટકાવે છે જે નીચા તાપમાનની સ્થિતિમાં પ્રાઈમર બિન-વિશિષ્ટ એનલીંગ અથવા પ્રાઈમર ડાઇમરની રચનાને કારણે થાય છે, આમ સુધારે છે. એમ્પ્લીફિકેશન પ્રતિક્રિયાની વિશિષ્ટતા.આ રીએજન્ટ ઝડપી હોટ-સ્ટાર્ટિંગ હાંસલ કરવા માટે ઑપ્ટિમાઇઝ્ડ qPCR ચોક્કસ બફર અને UNG/dUTP વિરોધી પ્રદૂષણ પ્રણાલીનો ઉપયોગ કરે છે, જે qPCR પ્રતિક્રિયાઓની કાર્યક્ષમતા અને સંવેદનશીલતામાં ઘણો સુધારો કરે છે.તે ક્વોન્ટિટેશન વિસ્તારોની વિશાળ શ્રેણીમાં સારા પ્રમાણભૂત વળાંકો મેળવી શકે છે અને અવશેષ પીસીઆર ઉત્પાદનો અથવા એરોસોલ દૂષણને કારણે થતા ખોટા હકારાત્મક એમ્પ્લીફિકેશનને અસરકારક રીતે અટકાવે છે અને ચોક્કસ રીતે પરિમાણ કરી શકે છે.આ રીએજન્ટ એપ્લાઇડ બાયોસિસ્ટમ્સ, એપેન્ડોર્ફ, બાયો-રાડ અને રોચે વગેરે જેવા ઉત્પાદકોના મોટાભાગના ફ્લોરોસન્ટ જથ્થાત્મક પીસીઆર સાધનો સાથે સુસંગત છે અને લાયોફિલાઈઝ્ડ સ્વરૂપમાં સારી સ્થિરતા દર્શાવે છે.
રીએજન્ટ રચના
1. 5×HotstartPremix plus-UNG (Mg2+મફત) (ડીજી)
2. 250 એમએમ એમજીસીએલ2
3. 4×લાઇઓપ્રોટેક્ટન્ટ (વૈકલ્પિક)
સંગ્રહ શરતો
-20℃ પર લાંબા ગાળાના સંગ્રહ;4℃ પર 3 મહિના સુધી સ્ટોર કરી શકાય છે.ઉપયોગ કરતા પહેલા સારી રીતે મિક્સ કરો અનેવારંવાર ઠંડું અને પીગળવાનું ટાળો.
સાયકલિંગ પ્રોટોકોલ
| પ્રક્રિયા | ટેમ્પ. | સમય | સાયકલ |
| પાચન | 50℃ | 2 મિનિટ | 1 |
| પોલિમરેઝ સક્રિયકરણ | 95℃ | 1~5 મિનિટ | 1 |
| ડેનેચર | 95℃ | 10~20 સે | 40-50 |
| એનીલિંગ અને એક્સ્ટેંશન | 56~64℃ | 20~60 સે | 40-50 |
qPCR લિક્વિડ રિએક્શન Syસ્ટેમ તૈયારી
|
રચના |
25µL વોલ્યુમ |
50µL વોલ્યુમ |
અંતિમ એકાગ્રતા |
| 5×HotstartPremix plus-UNG(એમજી2+મફત) (ડીજી) | 5µL | 10µL | 1× |
| 250 એમએમ એમજીસીએલ2 | 0.45µL | 0.9µL | 4.5 એમએમ |
| 4×લ્યોપ્રોટેક્ટન્ટ1 | 6.25µL | 12.5µL | 1× |
| 25×પ્રાઇમર-પ્રોબ મિક્સ2 | 1µL | 2µL | 1× |
| ટેમ્પલેટ ડીએનએ3 | —— | —— | —— |
| ડીડીએચ2O | 25µL સુધી | 50µL સુધી | —— |
1. પ્રાઇમર્સ માટે 0.2μM ની અંતિમ સાંદ્રતા સામાન્ય રીતે સારા પરિણામો આપે છે;જ્યારે પ્રતિક્રિયા કામગીરી નબળી હોય, ત્યારે જરૂરિયાત મુજબ 0.2-1μM ની રેન્જમાં પ્રાઈમર સાંદ્રતાને સમાયોજિત કરો.શ્રેષ્ઠ સંયોજનો શોધવા માટે ગ્રેડિયન્ટ પ્રયોગો દ્વારા પ્રોબ એકાગ્રતા સામાન્ય રીતે 0.1-0.3μM ની રેન્જમાં ઑપ્ટિમાઇઝ કરવામાં આવે છે.
2. વિવિધ પ્રકારના નમૂનાઓમાં સમાયેલ લક્ષ્ય જનીનોની નકલ સંખ્યા બદલાય છે;જો જરૂરી હોય તો, શ્રેષ્ઠ ટેમ્પલેટ ઉમેરવાની રકમ નક્કી કરવા માટે ગ્રેડિયન્ટ ડિલ્યુશન કરી શકાય છે.
3. આ સિસ્ટમ lyophilized કરી શકાય છે;જ્યારે ગ્રાહકો ફ્રીઝિંગ-ડ્રાયિંગ આવશ્યકતાઓ વિના આ સિસ્ટમનો ઉપયોગ કરે છે, ત્યારે 4×લાઇઓપ્રોટેક્ટન્ટ પસંદગીપૂર્વક ઉમેરી શકાય છે;જો ફ્રીઝ-ડ્રાય પ્રોડક્ટ્સ જરૂરી હોય, લિક્વિડ રીએજન્ટ સ્ટેજ પ્રોડક્ટ પરફોર્મન્સ વેલિડેશન દરમિયાન, તેને 4×લાયોપ્રોટેક્ટન્ટ ઉમેરવું જોઈએ જેથી લાયોફિલાઈઝ્ડ સિસ્ટમના ઘટકો સાથે સુસંગતતા સુનિશ્ચિત થાય. અને અસરો.
જ્યારે સિસ્ટમનો ઉપયોગ થાય છેડી ફ્રીઝ-ડ્રાયિંગ માટે, તૈયાર કરો સિસ્ટમ as નીચેના:
| રચના | 25µL પ્રતિક્રિયા સિસ્ટમ |
| 5 ×હોટસ્ટાર્ટ પ્રિમિક્સ વત્તા-યુએનજી (એમજી2+મફત) (ડીજી) | 5µL |
| 250 એમએમ એમજીસીએલ2 | 0.45µL |
| 4×લ્યોપ્રોટેક્ટન્ટ | 6.25µL |
| 25×પ્રાઇમર-પ્રોબ મિક્સ | 1µL |
| ડીડીએચ2O | 18~20µL સુધી |
* જો ફ્રીઝ-ડ્રાયિંગ માટે અન્ય સિસ્ટમોની જરૂર હોય, તો કૃપા કરીને અલગથી સંપર્ક કરો.
લ્યોફિલાઇઝેશન પ્રક્રિયાss
| પ્રક્રિયા | ટેમ્પ. | સમય | શરત | દબાણ |
| પ્રી-ફ્રીઝિંગ | 4℃ | 30 મિનિટ | પકડી રાખવું |
1 એટીએમ |
| -50℃ | 60 મિનિટ | ઠંડક | ||
| -50℃ | 180 મિનિટ | પકડી રાખવું | ||
| પ્રાથમિક સૂકવણી | -30℃ | 60 મિનિટ | હીટિંગ |
અલ્ટીમેટ વેક્યુમ |
| -30℃ | 70 મિનિટ | પકડી રાખવું | ||
| ગૌણ સૂકવણી | 25℃ | 60 મિનિટ | હીટિંગ |
અલ્ટીમેટ વેક્યુમ |
| 25℃ | 300 મિનિટ | પકડી રાખવું |
2. ઉપરોક્ત lyophilization પ્રક્રિયા માત્ર સંદર્ભ માટે છે.વિવિધ ઉત્પાદન પ્રકારો અને વિવિધ ફ્રીઝ-ડ્રાયર્સમાં વિવિધ પરિમાણો હોય છે, તેથી વાસ્તવિકતા અનુસાર ગોઠવણો કરી શકાય છે.ઉપયોગ દરમિયાન શરતો.
3. વિવિધ લ્યોફિલાઈઝેશન પ્રક્રિયાઓ વિવિધ બેચના કદ માટે યોગ્ય હોઈ શકે છે.ઉત્પાદનો, જેથી જ્યારે મોટા પાયે ઉત્પાદન માટે ઉપયોગ કરવામાં આવે ત્યારે પર્યાપ્ત પરીક્ષણ માન્યતા કરવી આવશ્યક છે.
લ્યોફિલાઈઝનો ઉપયોગ કરવા માટેની સૂચનાઓડી પાવડર
1. લ્યોફિલાઇઝ્ડ પાવડરને સંક્ષિપ્તમાં સેન્ટ્રીફ્યુજ કરો;
2. લ્યોફિલાઈઝ્ડ પાવડરમાં ન્યુક્લીક એસિડ ટેમ્પલેટ ઉમેરો અને 25µL સુધી પાણી ઉમેરો;
3. સેન્ટ્રીફ્યુગેશન દ્વારા સારી રીતે મિક્સ કરો અને મશીન પર ચલાવો.
ગુણવત્તા નિયંત્રણ:
1. કાર્યાત્મક પરીક્ષણ: qPCR ની સંવેદનશીલતા, વિશિષ્ટતા, પુનઃઉત્પાદનક્ષમતા.
2. કોઈ એક્સોજેનસ ન્યુક્લિઝ પ્રવૃત્તિ નથી, કોઈ એક્સોજેનસ એન્ડો/એક્સોન્યુક્લીઝ દૂષણ નથી.
પ્રૌધ્યોગીક માહીતી:
1. સુપરસ્ટાર્ટ qPCR પ્રીમિક્સ પ્લસ-યુએનજી નવલકથા હોટ-સ્ટાર્ટ એન્ઝાઇમનો ઉપયોગ કરે છે જે 1~5 મિનિટમાં ઝડપી હોટ-સ્ટાર્ટિંગને સક્ષમ કરે છે;ખાસ બફર ફોર્મ્યુલેશન દ્વારા તે મલ્ટિપ્લેક્સ ફ્લોરોસન્ટ જથ્થાત્મક PCR પ્રતિક્રિયાઓ માટે યોગ્ય છે.
2. તે ઉચ્ચ વિશિષ્ટતા ધરાવે છે જે નોંધપાત્ર રીતે ફ્લોરોસેન્સ જથ્થાત્મક PCR મર્યાદા શોધની સંવેદનશીલતાને સુધારે છે, એમ્પ્લીફિકેશન કર્વ્સને નોર્મલાઇઝેશન બનાવે છે, ફ્લોરોસેન્સ મૂલ્ય ઓછી સાંદ્રતા ટેમ્પ્લેટ્સ પર સ્પષ્ટ સુધારણા મેળવે છે, ઉચ્ચ સંવેદનશીલતા ફ્લોરોસેન્સ જથ્થાત્મક PCR શોધ રીએજન્ટ્સ તરીકે યોગ્ય.
3. નીચા એન્નીલિંગ તાપમાન સાથે અથવા 200bp ટુકડાઓ કરતાં વધુ લાંબા પ્રાઇમર્સ માટે, 3-પગલાની પદ્ધતિની ભલામણ કરવામાં આવે છે.
4. dUTP નો ઉપયોગ કરવાની કાર્યક્ષમતા અને UNG એન્ઝાઇમ પ્રત્યેની સંવેદનશીલતા વિવિધ લક્ષ્ય જનીનો માટે અલગ છે, આમ જો UNG સિસ્ટમનો ઉપયોગ શોધ સંવેદનશીલતામાં ઘટાડો તરફ દોરી જાય છે, તો પ્રતિક્રિયા પ્રણાલીને સમાયોજિત અને ઑપ્ટિમાઇઝ કરવી જોઈએ.જો તકનીકી સપોર્ટની જરૂર હોય, તો કૃપા કરીને અમારી કંપનીનો સંપર્ક કરો.
5. એમ્પ્લીફિકેશન પહેલાં અને પછી સમર્પિત વિસ્તારો અને પાઇપેટનો ઉપયોગ કરો, ઓપરેશન દરમિયાન મોજા પહેરો અને તેમને વારંવાર બદલો;પીસીઆર ઉત્પાદનો દ્વારા નમૂનાઓના દૂષણને ઘટાડવા માટે પીસીઆર પૂર્ણ થયા પછી પ્રતિક્રિયા ટ્યુબ ખોલશો નહીં.
