ડીએનએ એક્સટ્રેક્શન મીની કિટ
આ કિટ ઑપ્ટિમાઇઝ બફર સિસ્ટમ અને સિલિકા જેલ કૉલમ પ્યુરિફિકેશન ટેક્નોલોજીને અપનાવે છે, જે TAE અથવા TBE એગેરોઝ જેલની વિવિધ સાંદ્રતામાંથી 70 bp - 20 kb DNA ટુકડાઓ પુનઃપ્રાપ્ત કરી શકે છે.ડીએનએ શોષણ સ્તંભ ઉચ્ચ મીઠાની સ્થિતિમાં ડીએનએને ખાસ રીતે શોષી શકે છે.આ ઉપરાંત, કિટ પીસીઆર ઉત્પાદનો, એન્ઝાઇમેટિક પ્રતિક્રિયા પ્રણાલીઓ અથવા અન્ય પદ્ધતિઓ દ્વારા મેળવેલા ક્રૂડ ડીએનએ ઉત્પાદનોમાંથી સીધા જ ડીએનએ ટુકડાઓને શુદ્ધ કરી શકે છે, અને પ્રોટીન, અન્ય કાર્બનિક સંયોજનો, અકાર્બનિક મીઠું આયનો અને ઓલિગોન્યુક્લિયોટાઇડ પ્રાઇમર્સ જેવી અશુદ્ધિઓ દૂર કરી શકે છે.તે સુનિશ્ચિત કરી શકે છે કે શુદ્ધિકરણ 10-15 મિનિટની અંદર પૂર્ણ થઈ શકે છે.શુદ્ધ થયેલ ડીએનએનો સીધો ઉપયોગ લિગેશન, ટ્રાન્સફોર્મેશન, એન્ઝાઇમ પાચન, ઇન વિટ્રો ટ્રાન્સક્રિપ્શન, પીસીઆર, સિક્વન્સિંગ, માઇક્રોઇન્જેક્શન વગેરે માટે થઈ શકે છે.
સંગ્રહ શરતો
-15 ~ -25 ℃ પર સ્ટોર કરો અને ઓરડાના તાપમાને પરિવહન કરો.
ઘટકો
| ઘટકો | (100 rxns) |
| બફર જીડીપી | 80 મિલી |
| બફર GW | 2 × 20 મિલી |
| એલ્યુશન બફર | 20 મિલી |
| ફાસ્ટપ્યોર ડીએનએ મિની કૉલમ-જી | 100 |
બફર જીડીપી:ડીએનએ બંધનકર્તા બફર.
બફર GW:બફર ધોવા;ઉપયોગ કરતા પહેલા બોટલ પર દર્શાવેલ વોલ્યુમ દ્વારા સંપૂર્ણ ઇથેનોલ ઉમેરો.
ઇલ્યુશન બફર:એલ્યુશન.
ફાસ્ટપ્યોર ડીએનએ મિની કૉલમ-જી:ડીએનએ શોષણ કૉલમ.
કલેક્શન ટ્યુબ 2 મિલી:ગાળણ માટે સંગ્રહ ટ્યુબ.
તૈયાર કરેલી સામગ્રી
1.5 મિલી વંધ્યીકૃત ટ્યુબ, સંપૂર્ણ ઇથેનોલ અને આઇસોપ્રોપેનોલ (જ્યારે ડીએનએ ટુકડો ≤100 bp, 1 વોલ્યુમ ઉમેરો
isopropanol થી 1 વોલ્યુમ જેલ), પાણી સ્નાન.
પ્રયોગ પ્રક્રિયા
ઉપયોગ કરતા પહેલા ટેગ પર દર્શાવેલ બફર GW ને પાતળું કરવા માટે 80 મિલી ઇથેનોલ ઉમેરો, ઓરડાના તાપમાને સ્ટોર કરો.
મિકેનિઝમ
1. પીસીઆર પ્રતિક્રિયા ઉકેલ
જેલ નિષ્કર્ષણ યોજના: સમાન વોલ્યુમ બફર જીડીપી પીસીઆર પ્રતિક્રિયા ઉકેલ પુનઃપ્રાપ્તિ યોજના ઉમેરો:વોલ્યુમ બફરના 5 ગણા ઉમેરો
2. જીડીપી જેલના વોલ્યુમની ગણતરી કરો(100 μl બરાબર 100 મિલિગ્રામ)
જેલ ઓગાળો
3. 50 ~ 55 પર પ્રીહિટ કરો℃
4. બાંધો ધોવા
બફર જીડીપીના 300 μL ઉમેરો*
બફર GW ના 700 μL ઉમેરો
બફર GW ના 700 μL ઉમેરો
5. એલ્યુટ
20 - 30μL ઇલ્યુશન બફર અથવા ડીયોનાઇઝ્ડ પાણી ઉમેરો
નોંધ* આ પગલા વિના પીસીઆર પ્રતિક્રિયા પ્રવાહી પુનઃપ્રાપ્તિ
જેલ નિષ્કર્ષણ કાર્યક્રમ
1. ડીએનએ ટુકડાઓનું વિભાજન કરવા માટે ડીએનએ ઇલેક્ટ્રોફોરેસીસ પછી, યુવી પ્રકાશ હેઠળ એગોરોઝ જેલમાંથી ડીએનએ ટુકડાની એક પટ્ટીને એક્સાઇઝ કરો.જેલના દેખીતા ભેજને શોષી લેવા માટે શોષક કાગળનો ઉપયોગ કરવાની ભલામણ કરવામાં આવે છે અને શક્ય હોય તેટલું વધારાનું એગરોઝ દૂર કરીને જેલના ટુકડાનું કદ ઓછું કરો.તેના જથ્થાની ગણતરી કરવા માટે જેલ સ્લાઇસ (માઇક્રોસેન્ટ્રીફ્યુજ ટ્યુબ વિના)નું વજન કરો: 100 મિલિગ્રામ જેલસ્લાઇસનું પ્રમાણ આશરે 100 μL છે, એમ ધારીને કે ઘનતા 1g/ml છે.
2. સમાન વોલ્યુમ બફર જીડીપી ઉમેરો, 7-10 મિનિટ માટે 50~55℃ પર ઉકાળો (જેલના કદ અનુસાર, જેલ સંપૂર્ણપણે ઓગળી જાય ત્યાં સુધી સેવનનો સમય સમાયોજિત કરો).સેવન દરમિયાન ટ્યુબને 2 વખત ઊંધી કરો.
Δ બફર જીડીપીના 1-3 વોલ્યુમનો ઉમેરો DNA પુનઃપ્રાપ્તિ કાર્યક્ષમતાને પ્રભાવિત કરશે નહીં.જો DNA ટુકડો <100 bp પુનઃપ્રાપ્ત કરવો હોય, તો બફર જીડીપીના 3 વોલ્યુમ ઉમેરવાની જરૂર છે;જ્યારે જેલ સ્લાઇસ સંપૂર્ણપણે ઓગળી જાય, ત્યારે 1 વોલ્યુમ આઇસોપ્રોપેનોલ ઉમેરો અને સારી રીતે ભળી દો, પછી આગલા પગલા પર ચાલુ રાખો.
3. નમૂનાને ટ્યુબના તળિયે લાવવા માટે સંક્ષિપ્તમાં સેન્ટ્રીફ્યુજ કરો, ફાસ્ટપ્યોર ડીએનએ મિની કૉલમ-જીને કલેક્શન ટ્યુબમાં 2 મિલી દાખલ કરો, એક વખત મહત્તમ 700 μL દ્રાવણને કાળજીપૂર્વક સ્થાનાંતરિત કરો.
ગાળણ સ્તંભોનો સમય, 30-60 સેકન્ડ માટે 12,000 rpm (13,800 X g) પર સેન્ટ્રીફ્યુજ.
4. ફિલ્ટ્રેટ કાઢી નાખો અને સ્તંભમાં 300 μL બફર GDP ઉમેરો, 1 મિનિટ માટે ઓરડાના તાપમાને ઉકાળો, 30-60 સેકન્ડ માટે 12,000 rpm (13,800 X g) પર સેન્ટ્રીફ્યુજ કરો.
5. ફિલ્ટ્રેટ કાઢી નાખો અને કૉલમમાં 700 μL બફર GW ઉમેરો (ચોક્કસ ઇથેનોલ અગાઉથી ઉમેરવામાં આવ્યું છે કે કેમ તે તપાસો!) 30-60 સેકન્ડ માટે 12,000 rpm (13,800 X g) પર સેન્ટ્રીફ્યુજ કરો.
Δ શોષણ સ્તંભની દિવાલની આસપાસ બફર GW ઉમેરો, અથવા બફર GW બેક કવર ઉમેરો અને ટ્યુબની દિવાલને વળગી રહેલા મીઠાને સંપૂર્ણપણે ફ્લશ કરવામાં મદદ કરવા માટે તેને 2 - 3 વખત ઊંધુંચત્તુ મિક્સ કરો.
6. પગલું 5 પુનરાવર્તન કરો.
Δ બફર GW સાથે બે વાર ફ્લશ કરવાથી મીઠું સંપૂર્ણપણે દૂર થઈ ગયું છે તેની ખાતરી થઈ શકે છે અને પછીના પ્રયોગો પરની અસર દૂર થઈ શકે છે.
7. ફિલ્ટ્રેટ કાઢી નાખો અને ખાલી સ્તંભને 12,000 rpm (13,800 X g) પર 2 મિનિટ માટે સેન્ટ્રીફ્યુજ કરો.
8. સ્તંભને સ્વચ્છ 1.5 મિલી માઈક્રોસેન્ટ્રીફ્યુજ ટ્યુબમાં દાખલ કરો, કોલમ મેમ્બ્રેનની મધ્યમાં 20 - 30 μL ઈલ્યુશન બફર ઉમેરો, 2 મિનિટ માટે પકાવો અને પછી 12,000 rpm (13,800 X g) પર સેન્ટ્રીફ્યુજ કરો.કૉલમ કાઢી નાખો, મેળવેલ ડીએનએ -20 પર સંગ્રહિત કરો.
Δ સ્ટેપ 8 ના સુપરનેટન્ટને ફરીથી એલ્યુટ કરવા માટે કૉલમમાં સ્થાનાંતરિત કરવું અને ઇલ્યુશન બફરને 55 પર પ્રીહિટ કરવું (જ્યારે DNA ફ્રેગમેન્ટ >3 kb) પુનઃપ્રાપ્તિ કાર્યક્ષમતા વધારવા માટે મદદરૂપ થઈ શકે છે.
પીસીઆર ઉત્પાદનો પુનઃપ્રાપ્તિ કાર્યક્રમ
આ પ્રોટોકોલ પીસીઆર ઉત્પાદનો, એન્ઝાઈમેટિક પ્રતિક્રિયા સિસ્ટમ અને અન્ય ડીએનએ ક્રૂડ ઉત્પાદનો (આનુવંશિક ડીએનએ સહિત)માંથી ડીએનએ ટુકડાઓને શુદ્ધ કરવા માટે લાગુ પડે છે.આ સોલ્યુશન વિવિધ ન્યુક્લિયોટાઇડ્સ, પ્રાઇમર્સ, પ્રાઇમર ડાયમર્સ, મીઠાના અણુઓ, ઉત્સેચકો અને અન્ય અશુદ્ધિઓને અસરકારક રીતે દૂર કરી શકે છે.
1. સંક્ષિપ્તમાં સેન્ટ્રીફ્યુજ પીસીઆર ઉત્પાદનો, એન્ઝાઇમેટિક પ્રતિક્રિયા ઉકેલ અને અન્ય ડીએનએ ક્રૂડ ઉત્પાદનો.પીપેટ વડે તેમના જથ્થાનો અંદાજ કાઢો અને વંધ્યીકૃત 1.5 મિલી અથવા 2 મિલી ટ્યુબમાં સ્થાનાંતરિત કરો.100 μL સુધી વોલ્યુમ સુધી ddH2O ઉમેરો;જ્યારે ઉચ્ચ સાંદ્રતા સાથે જીનોમિક ડીએનએ માટે, ddH2O સાથે 300 μL સુધી પાતળું કરવાથી પુનઃપ્રાપ્તિ કાર્યક્ષમતામાં સુધારો કરવામાં મદદ મળશે.
2. બફર જીડીપીના 5 વોલ્યુમ ઉમેરો, ઊંધી અથવા વમળ દ્વારા સારી રીતે ભળી દો.જો 100 bp થી વધુ રસનો DNA ટુકડો, ઇથેનોલના વધારાના 1.5 વોલ્યુમો (નમૂનાઓ + બફર GDP) ઉમેરવાની જરૂર છે.
3. કલેક્શન ટ્યુબમાં કૉલમ પાછું દાખલ કરો, મિશ્રણને કૉલમમાં સ્થાનાંતરિત કરો, 30 – 60 સેકન્ડ માટે 12,000 rpm (13,800 ×g) પર સેન્ટ્રીફ્યુજ કરો.જો મિશ્રિત દ્રાવણનું પ્રમાણ >700 µL હોય, તો શોષણ કોલમને કલેક્શન ટ્યુબમાં પાછું મૂકો, બાકીના સોલ્યુશનને શોષણ કોલમમાં સ્થાનાંતરિત કરો અને 30 – 60 સેકન્ડ માટે 12,000 rpm (13,800 × g) પર સેન્ટ્રીફ્યુજ કરો.
4. આગળનું પ્રદર્શન 08- 1/જેલ નિષ્કર્ષણ પ્રોગ્રામના 5 – 8 પગલાનો સંદર્ભ આપે છે.
અરજીઓ
TAE અથવા TBE agarose જેલની વિવિધ સાંદ્રતા;પીસીઆર ઉત્પાદનો, એન્ઝાઇમેટિક પ્રતિક્રિયા પ્રણાલીઓ અથવા અન્ય ક્રૂડ ડીએનએ ઉત્પાદનો વિવિધ પદ્ધતિઓ દ્વારા મેળવવામાં આવે છે.થી રેન્જના ટુકડાઓ પુનઃપ્રાપ્ત70 bp -20 kb.
નોંધો
માત્ર સંશોધન માટે ઉપયોગ.ડાયગ્નોસ્ટિક પ્રક્રિયાઓમાં ઉપયોગ માટે નથી.
1. ઉપયોગ કરતા પહેલા ટેગ પર દર્શાવેલ બફર GW ને પાતળું કરવા માટે 80 મિલી ઇથેનોલ ઉમેરો, ઓરડાના તાપમાને સ્ટોર કરો.
2. જો બફર જીડીપી નીચા-તાપમાન સંગ્રહ દરમિયાન અવક્ષેપ કરવા માટે સરળ હોય, તો તેને ઉપયોગ કરતા પહેલા અમુક સમય માટે ઓરડાના તાપમાને મૂકી શકાય છે.જો જરૂરી હોય તો, જ્યાં સુધી અવક્ષેપ સંપૂર્ણપણે ઓગળી ન જાય ત્યાં સુધી તેને 37℃ વોટર બાથમાં પહેલાથી ગરમ કરી શકાય છે, અને પછી તે મિશ્રણ પછી વાપરી શકાય છે.
3. પાણીના સ્નાનનું તાપમાન અગાઉથી 50 ~ 55℃ પર સેટ કરો.
4. 08-1/જેલ નિષ્કર્ષણ પ્રોગ્રામ સ્ટેપ 1 માં, જેલ સ્લાઇસનું કદ ઓછું કરવાથી ઓગળવાનો સમય નોંધપાત્ર રીતે ઘટશે અને પુનઃપ્રાપ્તિ કાર્યક્ષમતામાં વધારો થશે (રેખીયકૃત ડીએનએ જ્યારે ઊંચા તાપમાને સતત ખુલ્લા રહે છે ત્યારે તે સરળતાથી હાઇડ્રોલાઈઝ થાય છે).લાંબા સમય સુધી ડીએનએ જેલને યુવીમાં ન લો, કારણ કે અલ્ટ્રાવાયોલેટ પ્રકાશ ડીએનએને નુકસાન પહોંચાડી શકે છે.
5. 08- 1/જેલ નિષ્કર્ષણ પ્રોગ્રામ સ્ટેપ 2 માં જેલને સંપૂર્ણપણે વિસર્જન કરો, અન્યથા DNA પુનઃપ્રાપ્તિ કાર્યક્ષમતા ગંભીર રીતે પ્રભાવિત થશે.
6. પ્રીહિટ ઇલ્યુશન બફર અથવા ddH2O થી 55℃ સુધી, જે DNA ઇલ્યુશન કાર્યક્ષમતા સુધારવા માટે મદદરૂપ છે.ડીએનએને 2.5 એમએમ ટ્રિસ-એચસીએલ, પીએચ 7.0 - 8.5ના એલ્યુએન્ટમાં સંગ્રહિત કરવાની ભલામણ કરવામાં આવે છે.
