M-MLV રિવર્સ ટ્રાન્સક્રિપ્ટેસ
RevScript રિવર્સ ટ્રાન્સક્રિપ્ટ આનુવંશિક ઇજનેરી તકનીક દ્વારા મેળવવામાં આવે છે.તે ઉચ્ચ cDNA સંશ્લેષણ ક્ષમતા, થર્મલ સ્થિરતા અને પ્રતિક્રિયા તાપમાન મર્યાદા (60 ° સે સુધી) ધરાવે છે.સંશ્લેષિત cDNA ઉત્પાદન 10 kb સુધીનું છે.તે ટેમ્પલેટ્સની એફિનિટી વધારે છે અને જટિલ સેકન્ડરી સ્ટ્રક્ચર અથવા નીચા કોપી જનીનો સાથે આરએનએ ટેમ્પલેટ્સના રિવર્સ ટ્રાન્સક્રિપ્શન માટે યોગ્ય છે.
ઘટકો
| ઘટક | HC2003બી (10,000U) | HC2003બી (5*10,000U) | HC2003બી (200,000U) |
| RevScript રિવર્સ ટ્રાન્સક્રિપ્ટેસ (200U/μL) | 50 μL | 5×50 μL | 1 એમએલ |
| 5 × RevScript બફર | 250 μL | 1.25 એમએલ | 5 એમએલ |
સંગ્રહ સ્થિતિ
આ ઉત્પાદન -25°C~-15°C પર 2 વર્ષ માટે સંગ્રહિત કરવું જોઈએ.
એકમ વ્યાખ્યા
પ્રાઈમર તરીકે ઓલિગો(ડીટી) નો ઉપયોગ કરીને એક એકમ 10 મિનિટમાં 37°C પર એસિડ-અદ્રાવ્ય સામગ્રીમાં 1 nmol dTTP નો સમાવેશ કરે છે.
પ્રતિક્રિયા સેટઅપ
1.આરએનએ ટેમ્પલેટનું વિકૃતિકરણ (આ પગલું વૈકલ્પિક છે, આરએનએ ટેમ્પલેટનું વિકૃતિકરણ ગૌણ માળખું ખોલવામાં મદદ કરે છે, જે પ્રથમ સ્ટ્રાન્ડ સીડીએનએની ઉપજને સુધારશે.)
| ઘટકો | વોલ્યુમ (μL) |
| RNase ફ્રી ddH2O | થી 13 |
| ઓલિગો(ડીટી)18 (50 μmol/L) અથવા રેન્ડમ પ્રાઈમર (50 μmol/L) અથવા જીન સ્પેસિફિક પ્રાઇમર્સ (2 μmol/L) | 1 |
| અથવા 1 | |
| અથવા 1 | |
| આરએનએ ટેમ્પલેટ | X a |
નોંધો:
1) a: કુલ RNA: 1-5 ug અથવા mRNA: 1-500 ng
2) 5 મિનિટ માટે 65 ° સે તાપમાને ઉકાળો, પછી તરત જ બરફ પર 2 મિનિટ માટે ઠંડું કરો.પ્રતિક્રિયા પ્રવાહી એકત્રિત કરવા માટે સંક્ષિપ્ત સેન્ટ્રીફ્યુગેશન, નીચેના કોષ્ટકમાં બતાવ્યા પ્રમાણે રિવર્સ ટ્રાન્સક્રિપ્શન પ્રતિક્રિયા ઉકેલ ઉમેરો.ધીમેધીમે મિશ્રણ કરવા માટે પીપેટ.
1.પ્રતિક્રિયા મિશ્રણની તૈયારી (20 μL વોલ્યુમ)
| ઘટકો | વોલ્યુમ (μL) |
| પાછલા પગલાનું મિશ્રણ | 13 |
| 5×બફર | 4 |
| dNTP મિક્સ (10nmol/L) | 1 |
| રિવર્સ ટ્રાન્સક્રિપ્ટેજ (200 U/μL) | 1 |
| RNase અવરોધક (40 U/μL) | 1 |
1.નીચેની શરતો હેઠળ પ્રતિક્રિયા કરો:
| તાપમાન (°C) | સમય |
| 25 °સેa | 5 મિનિટ |
| 42 °સેb | 15-30 મિનિટ |
| 85 °સેc | 5 મિનિટ |
નોંધો:
1) એ.રેન્ડમ હેક્સામર્સનો ઉપયોગ કરવા માટે જ 5 મિનિટ માટે 25°C તાપમાને ઉકાળવું જરૂરી છે.Oligo (dT) નો ઉપયોગ કરતી વખતે કૃપા કરીને આ પગલું અવગણો18અથવા જીન સ્પેસિફિક પ્રાઈમર.
2) બી.આગ્રહણીય રિવર્સ ટ્રાન્સક્રિપ્શન તાપમાન 42°C છે, જટિલ ગૌણ માળખાં અથવા ઉચ્ચ GC સામગ્રી ધરાવતા નમૂનાઓ માટે, પ્રતિક્રિયા તાપમાનને 50-55°C સુધી વધારવાની ભલામણ કરવામાં આવે છે.
3) સી.રિવર્સ ટ્રાન્સક્રિપ્ટેસને નિષ્ક્રિય કરવા માટે 5 મિનિટ માટે 85°C પર ગરમ કરો.
4) ઉત્પાદનનો સીધો PCR અથવા qPCR પ્રતિક્રિયાઓમાં ઉપયોગ કરી શકાય છે અથવા ટૂંકા ગાળાના સ્ટોરેજ માટે -20°C પર સંગ્રહિત કરી શકાય છે.લાંબા ગાળાના સ્ટોરેજ માટે ઉત્પાદનોને અલિગુટ કરીને -80 ° સે પર સ્ટોર કરવાની ભલામણ કરવામાં આવે છે.વારંવાર ફ્રીઝ-થૉ ટાળો.
5) ઉત્પાદન એક-પગલાની RT-qPCR માટે યોગ્ય છે, દરેક 25μL પ્રતિક્રિયા પ્રણાલી માટે 10-20 U રિવર્સ ટ્રાન્સક્રિપ્ટેજ ઉમેરવાની ભલામણ કરવામાં આવે છે, અથવા વાસ્તવિક પરિસ્થિતિ અનુસાર ધીમે ધીમે રિવર્સ ટ્રાન્સક્રિપ્ટેજની માત્રામાં વધારો થાય છે.
નોંધો
1.કૃપા કરીને પ્રાયોગિક વિસ્તારને સ્વચ્છ રાખો;ઓપરેશન દરમિયાન સ્વચ્છ મોજા અને માસ્ક પહેરવા જોઈએ.RNase દૂષણને રોકવા માટે પ્રયોગમાં ઉપયોગમાં લેવાતી તમામ ઉપભોક્તા RNase મુક્ત હોવી જોઈએ.
2.આરએનએ ડિગ્રેડેશનને રોકવા માટે બધી પ્રક્રિયાઓ બરફ પર થવી જોઈએ.
3.રિવર્સ ટ્રાન્સક્રિપ્શનની ઉચ્ચ કાર્યક્ષમતા સુનિશ્ચિત કરવા માટે ઉચ્ચ ગુણવત્તાવાળા RNA નમૂનાઓની ભલામણ કરવામાં આવે છે.
4.આ ઉત્પાદન માત્ર સંશોધન ઉપયોગ માટે છે.
5.કૃપા કરીને તમારી સલામતી માટે, લેબ કોટ્સ અને નિકાલજોગ ગ્લોવ્સ સાથે કામ કરો.
