રોબસ્ટાર્ટ ટાક ડીએનએ પોલિમરેઝ
રોબસ્ટાર્ટ ટાક ડીએનએ પોલિમરેઝ એ હોટ સ્ટાર્ટ ડીએનએ પોલિમરેઝ છે.આ ઉત્પાદન PCR સિસ્ટમની તૈયારી અને એમ્પ્લીફિકેશનની પ્રક્રિયામાં પ્રાઇમર્સ અથવા પ્રાઇમર એકત્રીકરણના બિન-વિશિષ્ટ એનિલિંગને કારણે થતી બિન-વિશિષ્ટ પ્રતિક્રિયાને વધુ સારી રીતે અટકાવી શકતું નથી.તેથી, તે ઉત્તમ વિશિષ્ટતા ધરાવે છે અને ઓછી સાંદ્રતા ટેમ્પલેટ્સના એમ્પ્લીફિકેશન માટે વધુ અસરકારક છે, અને તે મલ્ટિપ્લેક્સ્ડ પીસીઆર એમ્પ્લીફિકેશન પ્રતિક્રિયા માટે યોગ્ય છે.તદુપરાંત, આ ઉત્પાદનમાં ખૂબ જ સારી લાગુ પડે છે, અને વિવિધ પ્રકારની પીસીઆર પ્રતિક્રિયાઓમાં સ્થિર એમ્પ્લીફિકેશન પરિણામો મેળવી શકાય છે.
ઘટકો
1.5 U/μL રોબસ્ટાર્ટ Taq DNA પોલિમરેઝ
2.10 × PCR બફર II (Mg²+ ફ્રી) (વૈકલ્પિક)
3.25 એમએમ એમજીસીએલ2(વૈકલ્પિક)
* 10 × PCR બફર II (Mg²+ ફ્રી) માં dNTP અને Mg²+ શામેલ નથી, કૃપા કરીને dNTPs અને MgCl ઉમેરો2પ્રતિક્રિયા સિસ્ટમ તૈયાર કરતી વખતે.
ભલામણ કરેલ એપ્લિકેશનો
1.ઝડપી એમ્પ્લીફિકેશન.
2.બહુવિધ એમ્પ્લીફિકેશન.
3.રક્ત, સ્વેબ્સ અને અન્ય નમૂનાઓનું સીધું એમ્પ્લીફિકેશન.
4.શ્વસન રોગોની તપાસ.
સંગ્રહ સ્થિતિ
લાંબા ગાળાના સંગ્રહ માટે -20 ° સે, ઉપયોગ કરતા પહેલા સારી રીતે મિશ્રિત થવું જોઈએ, વારંવાર ફ્રીઝ-થૉ ટાળો.
*જો રેફ્રિજરેશન પછી વરસાદ થાય, તો તે સામાન્ય છે;મિશ્રણ અને ઉપયોગ કરતા પહેલા ઓરડાના તાપમાને સંતુલિત કરવાની ભલામણ કરવામાં આવે છે.
એકમ વ્યાખ્યા
એક સક્રિય એકમ (U) એ એન્ઝાઇમની માત્રા તરીકે વ્યાખ્યાયિત કરવામાં આવે છે જે ટેમ્પલેટ/પ્રાઇમર તરીકે સક્રિય સૅલ્મોન શુક્રાણુ DNA નો ઉપયોગ કરીને 30 મિનિટ માટે 74°C પર એસિડ-અદ્રાવ્ય સામગ્રીમાં 10 nmol ડીઓક્સીરીબોન્યુક્લિયોટાઇડનો સમાવેશ કરે છે.
ગુણવત્તા નિયંત્રણ
1.SDS-PAGE ઇલેક્ટ્રોફોરેટિક શુદ્ધતા 98% થી વધુ.
2.એમ્પ્લીફિકેશન સંવેદનશીલતા, બેચ-ટુ-બેચ નિયંત્રણ, સ્થિરતા.
3.કોઈ એક્સોજેનસ ન્યુક્લિઝ પ્રવૃત્તિ નથી, કોઈ એક્સોજેનસ એન્ડોન્યુક્લિઝ અથવા એક્સોન્યુક્લિઝ દૂષણ નથી
સૂચનાઓ
પ્રતિક્રિયા સેટઅપ
| ઘટકો | વોલ્યુમ (μL) | અંતિમ એકાગ્રતા |
| 10 × PCR બફર II (Mg²+ મફત)a | 5 | 1× |
| dNTPs (10mM દરેક dNTP) | 1 | 200 μM |
| 25 એમએમ એમજીસીએલ2 | 2-8 | 1-4 એમએમ |
| રોબસ્ટાર્ટ ટાક ડીએનએ પોલિમરેઝ (5U/μL) | 0.25-0.5 | 1.25-2.5 યુ |
| 25 × પ્રાઈમર મિક્સb | 2 | 1× |
| ઢાંચો | - | 1 μg/પ્રતિક્રિયા |
| ડીડીએચ2O | 50 થી | - |
નોંધો:
1) એ.બફરમાં dNTP અને Mg²+ નથી, કૃપા કરીને dNTP અને MgCl ઉમેરો2પ્રતિક્રિયા સિસ્ટમ તૈયાર કરતી વખતે.
2) બી.જો qPCR/qRT-PCR માટે વપરાય છે, તો પ્રતિક્રિયા સિસ્ટમમાં ફ્લોરોસન્ટ પ્રોબ ઉમેરવી જોઈએ.સામાન્ય રીતે, 0.2 μM ની અંતિમ પ્રાઈમર સાંદ્રતા સારા પરિણામો આપશે;જો પ્રતિક્રિયા કામગીરી નબળી હોય, તો પ્રાઈમર સાંદ્રતા 0.2-1 μM ની રેન્જમાં ગોઠવી શકાય છે.ચકાસણી સાંદ્રતા સામાન્ય રીતે 0.1-0.3 μM ની રેન્જમાં ઑપ્ટિમાઇઝ કરવામાં આવે છે.પ્રાઈમર અને પ્રોબના શ્રેષ્ઠ સંયોજનને શોધવા માટે એકાગ્રતા ઢાળના પ્રયોગો કરી શકાય છે.
થર્મલ સાયકલિંગ પ્રોટોકોલ
| નિયમિત પીસીઆરપ્રક્રિયા | |||
| પગલું | તાપમાન | સમય | સાયકલ |
| પ્રિ-ડિનેચરેશન | 95℃ | 1-5 મિનિટ | 1 |
| વિકૃતિકરણ | 95℃ | 10-20 સે | 40-50 |
| એનીલિંગ / એક્સ્ટેંશન | 56-64℃ | 20-60 સે | |
| ઝડપી પીસીઆરપ્રક્રિયા | |||
| પગલું | તાપમાન | સમય | સાયકલ |
| પ્રિ-ડિનેચરેશન | 95℃ | 30 સે | 1 |
| વિકૃતિકરણ | 95℃ | 1-5 સે | 40-45 |
| એનીલિંગ / એક્સ્ટેંશન | 56-64℃ | 5-20 સે | |
નોંધો
1.ઝડપી DNA પોલિમરેઝનો એમ્પ્લીફિકેશન રેટ 1 kb/10 s કરતા ઓછો ન હોવો જોઈએ.તાપમાનમાં વધારો અને ઘટાડો દર, તાપમાન નિયંત્રણ મોડ અને વિવિધ પીસીઆર સાધનોની ગરમી વહન કાર્યક્ષમતા મોટા પ્રમાણમાં બદલાય છે, તેથી ચોક્કસ ઝડપી પીસીઆર સાધન માટે શ્રેષ્ઠ પ્રતિક્રિયા પરિસ્થિતિઓને શ્રેષ્ઠ બનાવવાની ભલામણ કરવામાં આવે છે.
2.ઉચ્ચ વિશિષ્ટતા અને સંવેદનશીલતા સાથે સિસ્ટમ અત્યંત અનુકૂલનક્ષમ છે.
3.ઉચ્ચ સંવેદનશીલતા પીસીઆર ડિટેક્શન રીએજન્ટ તરીકે ઉપયોગ માટે યોગ્ય છે, અને મલ્ટીપ્લેક્સ પીસીઆર એમ્પ્લીફિકેશન પ્રતિક્રિયાઓમાં ઉપયોગ કરી શકાય છે.
4.5′→3′ પોલિમરેઝ પ્રવૃત્તિ, 5′→3′ એક્સોનોક્લિઝ પ્રવૃત્તિ;કોઈ 3′→5′ exonuclease પ્રવૃત્તિ;કોઈ પ્રૂફરીડિંગ કાર્ય નથી.
5.PCR અને RT-PCR ના ગુણાત્મક અને માત્રાત્મક પરીક્ષણ માટે યોગ્ય.
6.PCR ઉત્પાદનનો 3′ છેડો A છે, જેને T વેક્ટરમાં સીધો ક્લોન કરી શકાય છે.
7.નીચા એન્નીલિંગ તાપમાનવાળા પ્રાઈમર માટે અથવા 200 bp કરતા લાંબા ટુકડાઓના એમ્પ્લીફિકેશન માટે ત્રણ-પગલાની પદ્ધતિની ભલામણ કરવામાં આવે છે.
