માઉસ જીનોટાઇપિંગ કીટ
કેટ નંબર: HCR2021A
આ પ્રોડક્ટ ડીએનએ ક્રૂડ એક્સટ્રેક્શન અને પીસીઆર એમ્પ્લીફિકેશન સિસ્ટમ સહિત માઉસ જીનોટાઇપ્સની ઝડપી ઓળખ માટે રચાયેલ કીટ છે.લિસિસ બફર અને પ્રોટીનનેઝ કે દ્વારા સાદા ક્લીવેજ પછી માઉસની પૂંછડી, કાન, અંગૂઠા અને અન્ય પેશીઓમાંથી સીધા જ પીસીઆર એમ્પ્લીફિકેશન માટે ઉત્પાદનનો ઉપયોગ કરી શકાય છે.રાતોરાત પાચન, ફિનોલ-ક્લોરોફોર્મ નિષ્કર્ષણ અથવા કૉલમ શુદ્ધિકરણ નથી, જે સરળ છે અને પ્રયોગો માટેનો સમય ઓછો કરે છે.ઉત્પાદન 2kb સુધીના લક્ષ્ય ટુકડાઓના એમ્પ્લીફિકેશન અને 3 જોડી પ્રાઈમર સાથે મલ્ટિપ્લેક્સ PCR પ્રતિક્રિયાઓ માટે યોગ્ય છે.2×માઉસ ટિશ્યુ ડાયરેક્ટ પીસીઆર મિક્સ આનુવંશિક રીતે એન્જિનિયર્ડ ડીએનએ પોલિમરેઝ, એમજી ધરાવે છે2+, dNTPs અને ઉચ્ચ એમ્પ્લીફિકેશન કાર્યક્ષમતા અને અવરોધક સહિષ્ણુતા પ્રદાન કરવા માટે એક ઑપ્ટિમાઇઝ બફર સિસ્ટમ, જેથી PCR પ્રતિક્રિયાઓ ટેમ્પલેટ અને પ્રાઇમર્સ ઉમેરીને અને ઉત્પાદનને 1× પર ફરીથી હાઇડ્રેટ કરીને હાથ ધરવામાં આવી શકે.આ પ્રોડક્ટ સાથે એમ્પ્લીફાઈડ PCR પ્રોડક્ટ 3′ છેડે એક અગ્રણી "A" બેઝ ધરાવે છે અને શુદ્ધિકરણ પછી તેનો સીધો ઉપયોગ TA ક્લોનિંગ માટે કરી શકાય છે.
ઘટકો
| ઘટક | કદ |
| 2×માઉસ ટિશ્યુ ડાયરેક્ટ પીસીઆર મિક્સ | 5×1.0mL |
| લિસિસ બફર | 2×20mL |
| પ્રોટીનનેઝ કે | 800μL |
સંગ્રહ શરતો
ઉત્પાદનો 2 વર્ષ માટે -25~-15℃ પર સંગ્રહિત થવી જોઈએ.પીગળ્યા પછી, લિસિસ બફરને ટૂંકા ગાળાના બહુવિધ ઉપયોગ માટે 2~8℃ પર સંગ્રહિત કરી શકાય છે, અને ઉપયોગ કરતી વખતે સારી રીતે ભળી શકાય છે.
અરજી
આ ઉત્પાદન માઉસ નોકઆઉટ વિશ્લેષણ, ટ્રાન્સજેનિક શોધ, જીનોટાઇપિંગ અને તેથી વધુ માટે યોગ્ય છે.
વિશેષતા
1.સરળ કામગીરી: જીનોમિક ડીએનએ કાઢવાની જરૂર નથી;
2.વિશાળ એપ્લિકેશન: વિવિધ માઉસ પેશીઓના સીધા એમ્પ્લીફિકેશન માટે યોગ્ય.
સૂચનાઓ
1.જીનોમિક ડીએનએનું પ્રકાશન
1) લિસેટની તૈયારી
ટીશ્યુ લાયસેટ માઉસ સેમ્પલની સંખ્યા અનુસાર તૈયાર કરવામાં આવે છે (ટિશ્યુ લાયસેટ ડોઝ મુજબ સાઇટ પર તૈયાર કરવું જોઈએ અને ઉપયોગ માટે સારી રીતે મિશ્રિત કરવું જોઈએ), અને એક નમૂના માટે જરૂરી રીએજન્ટ્સનું પ્રમાણ નીચે મુજબ છે:
| ઘટકો | વોલ્યુમ (μL) |
| પ્રોટીનનેઝ કે | 4 |
| લિસિસ બફર | 200 |
2) નમૂનાની તૈયારી અને લિસિસ
ભલામણ કરેલ ટીશ્યુ ઉપયોગ
| ના પ્રકારપેશી | ભલામણ કરેલ વોલ્યુમ |
| માઉસ પૂંછડી | 1-3 મીમી |
| માઉસ કાન | 2-5 મીમી |
| માઉસ ટો | 1-2 ટુકડાઓ |
સ્વચ્છ સેન્ટ્રીફ્યુજ ટ્યુબમાં યોગ્ય માત્રામાં માઉસ ટિશ્યુ સેમ્પલ લો, દરેક સેન્ટ્રીફ્યુજ ટ્યુબમાં 200μL તાજા ટિશ્યુ લાયસેટ ઉમેરો, વમળ અને શેક કરો, પછી 30 મિનિટ માટે 55℃ પર સેકવો અને પછી 3 મિનિટ માટે 98℃ પર ગરમ કરો.
3) સેન્ટ્રીફ્યુગેશન
લિસેટને સારી રીતે હલાવો અને 5 મિનિટ માટે 12,000 આરપીએમ પર સેન્ટ્રીફ્યુજ કરો.સુપરનેટન્ટનો ઉપયોગ પીસીઆર એમ્પ્લીફિકેશન માટે નમૂના તરીકે થઈ શકે છે.જો સંગ્રહ માટે નમૂનાની જરૂર હોય, તો સુપરનેટન્ટને અન્ય જંતુરહિત સેન્ટ્રીફ્યુજ ટ્યુબમાં સ્થાનાંતરિત કરો અને 2 અઠવાડિયા માટે -20℃ પર સ્ટોર કરો.
2.પીસીઆર એમ્પ્લીફિકેશન
2×માઉસ ટિશ્યુ ડાયરેક્ટ પીસીઆર મિક્સને -20℃ માંથી દૂર કરો અને બરફ પર પીગળી લો, ઊંધુંચત્તુ મિક્સ કરો અને નીચેના કોષ્ટક અનુસાર PCR પ્રતિક્રિયા સિસ્ટમ તૈયાર કરો (બરફ પર કામ કરો):
| ઘટકો | 25μLસિસ્ટમ | 50μLસિસ્ટમ | અંતિમ એકાગ્રતા |
| 2×માઉસ ટિશ્યુ ડાયરેક્ટ પીસીઆર મિક્સ | 12.5μL | 25μL | 1× |
| પ્રાઈમર 1 (10μM) | 1.0μL | 2.0μL | 0.4μM |
| પ્રાઈમર 2 (10μM) | 1.0μL | 2.0μL | 0.4μM |
| ક્લીવેજ ઉત્પાદનa | જરૂરિયાત મુજબ | જરૂરિયાત મુજબ |
|
| ડીડીએચ2O | 25μL સુધી | 50μL સુધી |
|
નૉૅધ:
a) ઉમેરવામાં આવેલ રકમ સિસ્ટમના 1/10 થી વધુ ન હોવી જોઈએ, અને જો વધુ પડતું ઉમેરવામાં આવે તો, PCR એમ્પ્લીફિકેશન અટકાવી શકાય છે.
ભલામણ કરેલ પીસીઆર શરતો
| સાયકલ પગલું | ટેમ્પ. | સમય | સાયકલ |
| પ્રારંભિક વિકૃતિકરણ | 94℃ | 5 મિનિટ | 1 |
| વિકૃતિકરણ | 94℃ | 30 સે | 35-40 |
| એનેલીંગa | Tm+3~5℃ | 30 સે | |
| વિસ્તરણ | 72℃ | 30 સેકન્ડ/કેબી | |
| અંતિમ વિસ્તરણ | 72℃ | 5 મિનિટ | 1 |
| - | 4℃ | પકડી રાખવું | - |
નૉૅધ:
a) એનિલિંગ તાપમાન: પ્રાઈમરના Tm મૂલ્યના સંદર્ભમાં, પ્રાઈમર +3~5℃ ના નાના Tm મૂલ્ય પર એનેલિંગ તાપમાન સેટ કરવાની ભલામણ કરવામાં આવે છે.
સામાન્ય સમસ્યાઓ અને ઉકેલો
1.કોઈ લક્ષિત સ્ટ્રીપ્સ નથી
1) અતિશય lysis ઉત્પાદન.નમૂનાની સૌથી યોગ્ય રકમ પસંદ કરો, સામાન્ય રીતે સિસ્ટમના 1/10 કરતાં વધુ નહીં;
2) નમૂનાનું કદ ખૂબ મોટું છે.લિસેટને 10 વખત પાતળું કરો અને પછી એમ્પ્લીફાય કરો, અથવા સેમ્પલનું કદ ઘટાડીને રિ-લિસિસ કરો;
3) પેશીના નમૂનાઓ તાજા નથી.તાજા પેશીના નમૂનાઓનો ઉપયોગ કરવાની ભલામણ કરવામાં આવે છે;
4) નબળી પ્રાઈમર ગુણવત્તા.પ્રાઈમરની ગુણવત્તા ચકાસવા અને પ્રાઈમર ડિઝાઇનને ઑપ્ટિમાઇઝ કરવા માટે એમ્પ્લીફિકેશન માટે જીનોમિક ડીએનએનો ઉપયોગ કરો.
2.બિન-વિશિષ્ટ એમ્પ્લીફિકેશન
1) એન્નીલિંગ તાપમાન ખૂબ ઓછું છે અને ચક્ર સંખ્યા ખૂબ વધારે છે.એન્નીલિંગ તાપમાનમાં વધારો અને ચક્રની સંખ્યામાં ઘટાડો;
2) નમૂનાની સાંદ્રતા ખૂબ ઊંચી છે.ટેમ્પલેટની માત્રામાં ઘટાડો અથવા એમ્પ્લીફિકેશન પછી ટેમ્પલેટને 10 વખત પાતળું કરો;
3) ગરીબ પ્રાઈમર વિશિષ્ટતા.પ્રાઇમર ડિઝાઇનને ઑપ્ટિમાઇઝ કરો.
નોંધો
1.નમૂનાઓ વચ્ચે ક્રોસ દૂષણ ટાળવા માટે, એકથી વધુ નમૂનાના સાધનો તૈયાર કરવા જોઈએ, અને જો વારંવાર ઉપયોગ જરૂરી હોય તો દરેક નમૂના પછી 2% સોડિયમ હાઇપોક્લોરાઇટ સોલ્યુશન અથવા ન્યુક્લીક એસિડ ક્લીનરથી ટૂલ્સની સપાટીને સાફ કરી શકાય છે.
2.તાજા માઉસ પેશીઓનો ઉપયોગ કરવાની ભલામણ કરવામાં આવે છે, અને એમ્પ્લીફિકેશન પરિણામોને અસર ન થાય તે માટે નમૂનાનું પ્રમાણ ખૂબ મોટું ન હોવું જોઈએ.
3.લિસિસ બફરે વારંવાર ફ્રીઝ-થૉ ટાળવું જોઈએ, અને ટૂંકા ગાળાના બહુવિધ ઉપયોગ માટે 2~8℃ પર સંગ્રહિત કરી શકાય છે.જો નીચા તાપમાને સંગ્રહિત કરવામાં આવે, તો વરસાદ થઈ શકે છે, અને ઉપયોગ કરતા પહેલા સંપૂર્ણપણે ઓગળી જવો જોઈએ.
4.પીસીઆર મિક્સ વારંવાર ફ્રીઝ-થૉ ટાળવું જોઈએ, અને ટૂંકા ગાળાના પુનરાવર્તિત ઉપયોગ માટે 4℃ પર સંગ્રહિત કરી શકાય છે.
5.આ ઉત્પાદન માત્ર વૈજ્ઞાનિક પ્રાયોગિક સંશોધન માટે છે અને તેનો ઉપયોગ ક્લિનિકલ નિદાન અથવા સારવારમાં થવો જોઈએ નહીં.
