યુરેસિલ ડીએનએ ગ્લાયકોસીલેઝ
Uracil-DNA Glycosylase (UNG અથવા UDG) એ 25 kDa ના પરમાણુ વજન સાથે E.coli નો રિકોમ્બિનન્ટ ક્લોન છે.તે uracil-સમાવતું સિંગલ-સ્ટ્રેન્ડેડ અને ડબલ-સ્ટ્રેન્ડેડ DNA માંથી મુક્ત uracil ના પ્રકાશનને ઉત્પ્રેરિત કરે છે, અને RNA સામે નિષ્ક્રિય છે, અને PCR એમ્પ્લીફિકેશન ઉત્પાદનોના દૂષણને રોકવા માટે તેનો ઉપયોગ કરી શકાય છે.ક્રિયાનો સિદ્ધાંત એ હકીકત પર આધારિત છે કે જો PCR પ્રતિક્રિયામાં dUTP ને dTTP માટે બદલવામાં આવે છે અને DU પાયા ધરાવતું PCR એમ્પ્લીફિકેશન ઉત્પાદન રચાય છે, તો એન્ઝાઇમ પસંદગીપૂર્વક U પાયાના ગ્લાયકોસિડિક બોન્ડને સિંગલ-સ્ટ્રેન્ડેડ અને ડબલ-સ્ટ્રેન્ડેડમાં તોડી શકે છે. ડીએનએ અને પીસીઆર એમ્પ્લીફિકેશન પ્રોડક્ટને ડિગ્રેડ કરે છે.
ભલામણ કરેલ એપ્લિકેશન
દૂષણ નિવારણ એમ્પ્લીફિકેશન
સંગ્રહ સ્થિતિ
લાંબા ગાળાના સંગ્રહ માટે -20 ° સે, ઉપયોગ કરતા પહેલા સારી રીતે મિશ્રિત થવું જોઈએ, વારંવાર ફ્રીઝ-થૉ ટાળો.
સંગ્રહ બફર
20 mM Tris-HCl (pH 8.0), 150 mM NaCl, 1 mM EDTA, 1 mM DTT, સ્ટેબિલાઇઝર, 50% ગ્લિસરોલ.
એકમ વ્યાખ્યા
37°C પર 1 કલાકમાં dU બેઝ ધરાવતા 1µg સિંગલ-સ્ટ્રેન્ડેડ DNAને ડિગ્રેડ કરવા માટે જરૂરી એન્ઝાઇમની માત્રા 1 યુનિટ છે.
ગુણવત્તા નિયંત્રણ
1.SDS-PAGE ઇલેક્ટ્રોફોરેટિક શુદ્ધતા 98% થી વધુ
2.એમ્પ્લીફિકેશન સંવેદનશીલતા, બેચ-ટુ-બેચ નિયંત્રણ, સ્થિરતા
3.UNG ના 1U ને 50℃ પર 2મિનિટ માટે સારવાર આપવામાં આવે તે પછી, 103 થી નીચેની નકલો ધરાવતો નમૂનો સંપૂર્ણપણે અધોગતિ પામવો જોઈએ અને કોઈ એમ્પ્લીફિકેશન પ્રોડક્ટનું ઉત્પાદન કરી શકાતું નથી.
4.કોઈ બાહ્ય ન્યુક્લિઝ પ્રવૃત્તિ નથી
સૂચનાઓ
| ઘટકો | વોલ્યુમ (μL) | અંતિમ એકાગ્રતા |
| 10 × PCR બફર (dNTP ફ્રી, Mg²+મફત) | 5 | 1× |
| dUTPs (dCTP, dGTP, dATP) | - | 200 μM |
| dUTP (dTTP બદલો) | - | 200-600 μM |
| 25 એમએમ એમજીસીએલ2 | 2-8 μL | 1-4 એમએમ |
| 5 U/μL Taq | 0.25 | 1.25 યુ |
| 5 U/μL UNG | 0.25 (0.1-0.5) | 0.25 યુ (0.1-0.5) |
| 25 × પ્રાઈમર મિક્સa | 2 | 1× |
| ઢાંચો | - | ~1μg/પ્રતિક્રિયા |
| ddH₂O | 50 થી | - |
નૉૅધ: a: જો qPCR/qRT-PCR માટે વપરાય છે, તો પ્રતિક્રિયા સિસ્ટમમાં ફ્લોરોસન્ટ પ્રોબ ઉમેરવી જોઈએ.સામાન્ય રીતે, 0.2 μM ની અંતિમ પ્રાઈમર સાંદ્રતા સારા પરિણામો આપી શકે છે;જ્યારે પ્રતિક્રિયા કામગીરી નબળી હોય છે, ત્યારે પ્રાઈમર સાંદ્રતા 0.2-1 μM ની રેન્જમાં ગોઠવી શકાય છે.સામાન્ય રીતે, ચકાસણી સાંદ્રતા 0.1-0.3 μM ની રેન્જમાં ઑપ્ટિમાઇઝ કરવામાં આવે છે.પ્રાઈમર અને પ્રોબના શ્રેષ્ઠ સંયોજનને શોધવા માટે એકાગ્રતા ઢાળના પ્રયોગો કરી શકાય છે.
નોંધો
1.UNG એન્ઝાઇમનો ઉપયોગ પીસીઆર એમ્પ્લીફિકેશન રિએક્શન પહેલા રિએક્શન સિસ્ટમમાંથી દૂષિત dUTP એમ્પ્લીફિકેશન ઉત્પાદનોને દૂર કરવા માટે કરી શકાય છે, પછી ઉત્પાદનના દૂષણને કારણે ખોટા-પોઝિટિવ પરિણામો ટાળવા માટે.
2.દૂષણ વિરોધી PCR પ્રતિક્રિયામાં ઉપયોગ કરવા માટે UNG એન્ઝાઇમ માટે શ્રેષ્ઠ તાપમાન સામાન્ય રીતે 2 મિનિટ માટે 50℃ છે;નિષ્ક્રિયતા સ્થિતિ 5 મિનિટ માટે 95℃ છે.
3.વારંવાર ફ્રીઝ-થૉ ટાળો, અને મોટા તાપમાનની વધઘટનો સંપર્ક કરશો નહીં.
4.એમ્પ્લીફાય કરવા માટેના વિવિધ જનીનોમાં dUTP ની વિવિધ ઉપયોગ કાર્યક્ષમતા અને UNG એન્ઝાઇમ પ્રત્યે સંવેદનશીલતા હોય છે, તેથી, જો UNG સિસ્ટમનો ઉપયોગ તપાસ સંવેદનશીલતામાં ઘટાડો તરફ દોરી જાય છે, તો પ્રતિક્રિયા સિસ્ટમને સમાયોજિત અને ઑપ્ટિમાઇઝ કરવી જોઈએ, જો તમને તકનીકી સહાયની જરૂર હોય, તો કૃપા કરીને સંપર્ક કરો. અમારી કંપની.
