વોર્મ સ્ટાર્ટ Bst 2.0 DNA પોલિમરેઝ (ગ્લિસરોલ ફ્રી)
Bst DNA પોલિમરેઝ V2 એ બેસિલસ સ્ટીરોથર્મોફિલસ DNA પોલિમરેઝ I માંથી ઉતરી આવ્યું છે, જેમાં 5′→3′ DNA પોલિમરેઝ પ્રવૃત્તિ અને મજબૂત સાંકળ રિપ્લેસમેન્ટ પ્રવૃત્તિ છે, પરંતુ 5′→3′ એક્સોનોક્લિઝ પ્રવૃત્તિ નથી.Bst DNA પોલિમરેઝ V2 સ્ટ્રાન્ડ-ડિસ્પ્લેસમેન્ટ, આઇસોથર્મલ એમ્પ્લીફિકેશન LAMP (લૂપ મિડિએટેડ આઇસોથર્મલ એમ્પ્લીફિકેશન) અને ઝડપી સિક્વન્સિંગ માટે આદર્શ રીતે યોગ્ય છે.Bst DNA પોલિમરેઝ V2 એ Bst DNA પોલિમરેઝ V2 (HC5005A) પર આધારિત હોટ-સ્ટાર્ટ વર્ઝન છે જે રિવર્સિબલ મોડિફિકેશન ટેક્નોલોજી દ્વારા મેળવવામાં આવે છે, જે ઓરડાના તાપમાને DNA પોલિમરેઝ પ્રવૃત્તિને અટકાવી શકે છે, તેથી પ્રતિક્રિયા સિસ્ટમને ઓરડાના તાપમાને સંચાલિત કરી શકાય છે અને ઘડવામાં આવી શકે છે. -વિશિષ્ટ એમ્પ્લીફિકેશન અને પ્રતિક્રિયા કાર્યક્ષમતામાં સુધારો, અને આ સંસ્કરણને લ્યોફિલાઇઝ કરી શકાય છે.વધુમાં, તેની પ્રવૃત્તિ ઊંચા તાપમાને પ્રકાશિત થાય છે, તેથી અલગ સક્રિયકરણ પગલાની જરૂર નથી.
ઘટકો
| ઘટક | HC5006A-01 | HC5006A-02 | HC5006A-03 |
Bst DNA પોલિમરેઝ V2 (ગ્લિસરોલ-ફ્રી)(8U/μL) | 0.2 એમએલ | 1 એમએલ | 10 એમએલ |
| 10×HC Bst V2 બફર | 1.5 એમએલ | 2×1.5 એમએલ | 3×10 એમએલ |
| MgSO4(100 એમએમ) | 1.5 એમએલ | 2×1.5 એમએલ | 2×10 એમએલ |
અરજીઓ
1.LAMP ઇસોથર્મલ એમ્પ્લીફિકેશન
2.ડીએનએ સ્ટ્રાન્ડ સિંગલ ડિસ્પ્લેસમેન્ટ પ્રતિક્રિયા
3.ઉચ્ચ GC જનીન સિક્વન્સિંગ
4.નેનોગ્રામ સ્તરની ડીએનએ સિક્વન્સિંગ.
સંગ્રહ સ્થિતિ
0°C થી નીચે પરિવહન અને -25°C~-15°C પર સંગ્રહિત કરવું.
એકમ વ્યાખ્યા
એક એકમ એ એન્ઝાઇમના જથ્થા તરીકે વ્યાખ્યાયિત કરવામાં આવે છે જે 65 ડિગ્રી સેલ્સિયસ પર 30 મિનિટમાં એસિડ અદ્રાવ્ય સામગ્રીમાં 25 nmol dNTP નો સમાવેશ કરે છે.
ગુણવત્તા નિયંત્રણ
1.પ્રોટીન શુદ્ધતા એસે (SDS-PAGE):Bst DNA પોલિમરેઝ V2 ની શુદ્ધતા ≥99% Coomassie Blue ડિટેક્શનનો ઉપયોગ કરીને SDS-PAGE વિશ્લેષણ દ્વારા નક્કી કરવામાં આવે છે.
2.Endonucleaseપ્રવૃત્તિ:37 ℃ પર 16 કલાક માટે 1 μg λDNA સાથે Bst DNA પોલિમરેઝ V2 નું ન્યૂનતમ 8 U ધરાવતી 50 μL પ્રતિક્રિયાનું સેવન કરવાથી નિર્ધારિત મુજબ કોઈ શોધી શકાય તેવું અધોગતિ થતું નથી.
3.Exonuclease પ્રવૃત્તિ:1 μg λ -હિંદ Ⅲ ડાયજેસ્ટ ડીએનએ સાથે 37 ℃ પર 16 કલાક માટે Bst DNA પોલિમરેઝ V2 નું ન્યૂનતમ 8 U ધરાવતી 50 μL પ્રતિક્રિયાનું સેવન કરવાથી નિર્ધારિત મુજબ કોઈ શોધી શકાય તેવું અધઃપતન થતું નથી.
4.નિકાસ પ્રવૃત્તિ:37°C તાપમાને 16 કલાક માટે 1 μg pBR322 DNA સાથે Bst DNA પોલિમરેઝ V2 નું ન્યૂનતમ 8 U ધરાવતી 50 μL પ્રતિક્રિયાના સેવનથી નિર્ધારિત મુજબ કોઈ શોધી શકાય તેવું અધોગતિ નથી.
5.RNase પ્રવૃત્તિ:1.6 μg MS2 RNA સાથે 37°C તાપમાને 16 કલાક માટે Bst DNA પોલિમરેઝ V2 નું ન્યૂનતમ 8 U ધરાવતી 50 μL પ્રતિક્રિયાનું સેવન કરવાથી નિર્ધારિત મુજબ કોઈ શોધી શકાય તેવું અધોગતિ થતું નથી.
6.ઇ. કોલીડીએનએ:Bst DNA પોલિમરેઝ V2 નું 120 U E. coli 16S rRNA લોકસ માટે વિશિષ્ટ પ્રાઇમર્સ સાથે TaqMan qPCR નો ઉપયોગ કરીને E. coli જીનોમિક ડીએનએની હાજરી માટે તપાસવામાં આવે છે.ઇ. કોલી જીનોમિક ડીએનએ દૂષણ ≤1 નકલ છે.
LAMP પ્રતિક્રિયા
| ઘટકો | 25μL |
| 10×HC Bst V2 બફર | 2.5 μL |
| MgSO4 (100 એમએમ) | 1.5 μL |
| dNTPs (દરેક 10 એમએમ) | 3.5 μL |
| SYTO™ 16 લીલો (25×)a | 1.0 μL |
| પ્રાઈમર મિશ્રણb | 6 μL |
| Bst DNA પોલિમરેઝ V2 (ગ્લિસરોલ-ફ્રી) (8 U/uL) | 1 μL |
| ઢાંચો | × μL |
| ddH₂O | 25 μL સુધી |
નોંધો:
1) એ.SYTOTM 16 ગ્રીન (25×): પ્રાયોગિક જરૂરિયાતો અનુસાર, અન્ય રંગોનો અવેજી તરીકે ઉપયોગ કરી શકાય છે;
2) બી.પ્રાઈમર મિક્સ: 20 µ M FIP, 20 µ M BIP, 2.5 µ M F3, 2.5 µ M B3, 5 µ M LF, 5 µ M LB અને અન્ય વોલ્યુમોના મિશ્રણ દ્વારા મેળવવામાં આવે છે.
પ્રતિક્રિયા અને સ્થિતિ
1 × HC Bst V2 બફર, ઇન્ક્યુબેશન તાપમાન 60°C અને 65°C ની વચ્ચે છે.
ગરમી નિષ્ક્રિયતા
80°C, 20મિનિટ
