5×નિયોસ્ક્રિપ્ટ ફાસ્ટ RT-qPCR પ્રીમિક્સ વત્તા-UNG
કેટ નંબર: HCB5142A
નિયોસ્ક્રિપ્ટ ફાસ્ટ આરટી પ્રિમિક્સ-યુએનજી (પ્રોબ qRT-PCR) એ એક-સ્ટેપ રિવર્સ ટ્રાંસ્ક્રિપ્શન અને ક્વોન્ટિટેટિવ પીસીઆર (qRT-PCR) માટે યોગ્ય અત્યંત સ્થિર વન-ટ્યુબ પ્રોબ-આધારિત મિશ્રણ છે.તે પ્રાઇમર્સ અને પ્રોબના પૂર્વ-મિશ્રણને સમર્થન આપે છે અને નીચા તાપમાને લાંબા સમય સુધી સંગ્રહ કર્યા પછી સ્થિર રહે છે.ચકાસવા માટેનો નમૂનો ઉપયોગ કરતી વખતે, વધારાના ટ્યુબ ઓપનિંગ/પાઇપેટીંગ ઓપરેશન વિના સીધા જ ઉમેરી શકાય છે.આ ઉત્પાદન ઘટકો પૂરા પાડે છે, દા.ત. હોટ-સ્ટાર્ટ ડીએનએ પોલિમરેઝ, એમ-એમએલવી, હીટ-લેબિલ યુરાસિલ ડીએનએ ગ્લાયકોસીલેઝ (TS-UNG), RNase ઇન્હિબિટર, MgCl2, dNTPs (dTTP ને બદલે dUTP સાથે), અને સ્ટેબિલાઇઝર્સ.આનુવંશિક રીતે સંશોધિત ઝડપી એમ્પ્લીફિકેશન રિવર્સ ટ્રાન્સક્રિપ્ટેસ અને ડીએનએ પોલિમરેઝ સાથે, 20-40 મિનિટમાં પીસીઆર એમ્પ્લીફિકેશન પૂર્ણ કરવું શક્ય છે.આ રીએજન્ટ એન્ટી-ઇન્હિબિટરી એમ્પ્લીફિકેશન એન્ઝાઇમ અને UNG એન્ઝાઇમના મિશ્ર ઉત્સેચકો સાથે qPCR માટે ખાસ બફરનો ઉપયોગ કરે છે.તેથી, તે લક્ષ્ય જનીનોનું સારું એમ્પ્લીફિકેશન મેળવી શકે છે અને PCR શેષ અને એરોસોલ પ્રદૂષણને કારણે થતા ખોટા એમ્પ્લીફિકેશનને અટકાવી શકે છે.આ રીએજન્ટ એપ્લાઇડ બાયોસિસ્ટમ્સ, એપેન્ડોર્ફ, બાયો-રેડ અને રોચે જેવા ઉત્પાદકોના મોટાભાગના ફ્લોરોસેન્સ જથ્થાત્મક પીસીઆર સાધનો સાથે સુસંગત છે.
ઘટક
1.25×નિયોસ્ક્રિપ્ટ ફાસ્ટ RTase/UNG મિક્સ
2.5×નિયોસ્ક્રિપ્ટ ફાસ્ટ આરટી પ્રિમિક્સ બફર (dUTP)
સંગ્રહ શરતો
બધા ઘટકોને લાંબા ગાળાના સ્ટોરેજ માટે -20℃ અને 3 મહિના સુધી 4℃ પર રાખવા જોઈએ.મહેરબાની કરીને ઉપયોગ કરતા પહેલા પીગળ્યા પછી અને સેન્ટ્રીફ્યુજ પછી સારી રીતે મિક્સ કરો.વારંવાર ફ્રીઝ-થૉ ટાળો.
qRT-PCR રિએક્શન સિસ્ટમની તૈયારી
| ઘટકો | 25μLસિસ્ટમ | 50μLસિસ્ટમ | અંતિમ એકાગ્રતા |
| 5×નિયોસ્ક્રિપ્ટ ફાસ્ટ આરટી પ્રિમિક્સ બફર (dUTP) | 5μL | 10μL | 1× |
| 25×નિયોસ્ક્રિપ્ટ ફાસ્ટ RTase/UNG મિક્સ | 1μL | 2μL | 1× |
| 25×પ્રાઇમર-પ્રોબ મિક્સa | 1μL | 2μL | 1× |
| ઢાંચો RNAb | - | - | - |
| ડીડીએચ2O | 25μL સુધી | 50μL સુધી | - |
1) a. પ્રાઈમરની અંતિમ સાંદ્રતા સામાન્ય રીતે 0.2μM હોય છે.વધુ સારા પરિણામો માટે, પ્રાઈમર સાંદ્રતાને 0.2-1μM ની રેન્જમાં ઑપ્ટિમાઇઝ કરી શકાય છે.સામાન્ય રીતે, ચકાસણી સાંદ્રતા 0.1-0.3μM ની રેન્જમાં ઑપ્ટિમાઇઝ કરી શકાય છે.
2) b. ઝડપી પીસીઆર પ્રક્રિયાનો ઉપયોગ કરતી વખતે, પ્રાઇમર્સ અને પ્રોબ્સની સાંદ્રતામાં વધારો કરવાથી વધુ સારા એમ્પ્લીફિકેશન પરિણામો આવી શકે છે, અને તેમનો ગુણોત્તર તે મુજબ ઑપ્ટિમાઇઝ થવો જોઈએ.
3) વિવિધ પ્રકારના નમૂનાઓમાં વિવિધ પ્રકારો અને અવરોધકની સામગ્રી અને લક્ષ્ય જનીનની નકલ સંખ્યા હોય છે.નમૂનાનું પ્રમાણ વાસ્તવિક સ્થિતિ દ્વારા ધ્યાનમાં લેવું જોઈએ.જો જરૂરી હોય તો, ન્યુક્લિઝ-મુક્ત પાણી અથવા TE બફર વડે નમૂનાને પાતળું કરો.
પ્રતિક્રિયા સીશરતો
| નિયમિત પીસીઆર પ્રક્રિયા | ઝડપી પીસીઆર પ્રક્રિયા | ||||||
| પ્રક્રિયા | ટેમ્પ. | સમય | સાયકલ | પ્રક્રિયા | ટેમ્પ. | સમય | સાયકલ |
| રિવર્સ ટ્રાન્સક્રિપ્શન | 50℃ | 10-20 મિનિટ | 1 | રિવર્સ ટ્રાન્સક્રિપ્શન | 50℃ | 5 મિનિટ | 1 |
| પોલિમરેઝ સક્રિયકરણ | 95℃ | 1-5 મિનિટ | 1 | પોલિમરેઝ સક્રિયકરણ | 95℃ | 30 | 1 |
| વિકૃતિકરણ | 95℃ | 10-20 સે | 40-50 | વિકૃતિકરણ | 95℃ | 1-3 સે | 40-50 |
| એનેલીંગ અને વિસ્તરણ | 56-64℃ | 20-60 | એનેલીંગ અને વિસ્તરણ | 56-64℃ | 3-20 સે | ||
ગુણવત્તા નિયંત્રણ
1.કાર્ય શોધ: qPCR ની સંવેદનશીલતા, વિશિષ્ટતા અને પુનરાવર્તિતતા.
2.કોઈ એક્સોજેનસ ન્યુક્લિઝ પ્રવૃત્તિ નથી: કોઈ એક્સોજેનસ એન્ડોન્યુક્લિઝ અને એક્સોન્યુક્લિઝ પ્રદૂષણ નથી.
નોંધો
1.ઝડપી DNA પોલિમરેઝનો એમ્પ્લીફિકેશન રેટ 1kb/10s કરતાં ઓછો નથી.અલગ-અલગ પીસીઆર ઇન્સ્ટ્રુમેન્ટમાં અલગ-અલગ હીટિંગ અને કૂલિંગ સ્પીડ, ટેમ્પરેચર કંટ્રોલ મોડ્સ અને થર્મલ વાહકતા હોય છે અને આ રીતે તમારા ચોક્કસ ફાસ્ટ પીસીઆર ઇન્સ્ટ્રુમેન્ટ સાથે સંયોજનમાં તમારા પ્રાઈમર/પ્રોબ કોન્સન્ટ્રેશન અને રનિંગ મેથડનું ઑપ્ટિમાઇઝેશન આવશ્યક છે.
2.આ ઉત્પાદન વ્યાપક લાગુ પડે છે, અને તે ઉચ્ચ-સંવેદનશીલતા પરમાણુ નિદાન માટે યોગ્ય છે.નીચા એન્નીલિંગ તાપમાનવાળા પ્રાઈમર માટે અથવા 200 bp થી વધુ લાંબા ટુકડાઓના એમ્પ્લીફિકેશન માટે ત્રણ-પગલાની PCR પદ્ધતિની ભલામણ કરવામાં આવે છે.
3.અલગ-અલગ એમ્પ્લીકોન્સમાં dUTP ની અલગ ઉપયોગ કાર્યક્ષમતા અને UNG પ્રત્યે જુદી જુદી સંવેદનશીલતા હોવાથી, જો UNG સિસ્ટમનો ઉપયોગ કરતી વખતે તપાસ સંવેદનશીલતા ઘટે તો રીએજન્ટ્સને ઑપ્ટિમાઇઝ કરવા જોઈએ.જો જરૂરી હોય તો તકનીકી સપોર્ટ માટે કૃપા કરીને અમારો સંપર્ક કરો.
4.કેરીઓવર પીસીઆર ઉત્પાદનોના એમ્પ્લીફિકેશનને ટાળવા માટે, એમ્પ્લીફિકેશન માટે સમર્પિત પ્રાયોગિક વિસ્તાર અને પીપેટ જરૂરી છે.ગ્લોવ્સ વડે ચલાવો અને વારંવાર બદલો અને એમ્પ્લીફિકેશન પછી પીસીઆર ટ્યુબ ખોલશો નહીં.
