રનેઝ ઇન્હિબિટર (ગ્લિસરોલ ફ્રી)
મ્યુરિન આરનેઝ ઇન્હિબિટર એ રિકોમ્બિનન્ટ મ્યુરિન આરનેઝ ઇન્હિબિટર છે જે ઇ.કોલીમાંથી વ્યક્ત અને શુદ્ધ થાય છે.તે બિન-સહસંયોજક બંધન દ્વારા 1:1 ગુણોત્તરમાં RNase A, B અથવા C સાથે જોડાય છે, ત્યાં ત્રણ ઉત્સેચકોની પ્રવૃત્તિને અટકાવે છે અને આરએનએને અધોગતિથી બચાવે છે.જો કે, એસ્પરગિલસમાંથી RNase 1, RNase T1, S1 Nuclease, RNase H અથવા RNase સામે તે અસરકારક નથી.Murine RNase અવરોધકનું પરીક્ષણ RT-PCR, RT-qPCR અને IVT mRNA દ્વારા કરવામાં આવ્યું હતું અને તે વિવિધ કોમર્શિયલ રિવર્સ ટ્રાન્સક્રિપ્ટેસ, DNA પોલિમરેસિસ અને RNA પોલિમરેસિસ સાથે સુસંગત હતું.
માનવ RNase અવરોધકોની તુલનામાં, મ્યુરિન RNase અવરોધકોમાં બે સિસ્ટીન નથી કે જે ઓક્સિડેશન માટે અત્યંત સંવેદનશીલ હોય છે જે અવરોધકને નિષ્ક્રિય કરે છે.જે તેને ડીટીટીની ઓછી સાંદ્રતા (1 એમએમ કરતા ઓછી) પર સ્થિર બનાવે છે.આ લક્ષણ તેને પ્રતિક્રિયાઓમાં ઉપયોગ માટે યોગ્ય બનાવે છે જ્યાં DTT ની ઊંચી સાંદ્રતા પ્રતિક્રિયા માટે પ્રતિકૂળ હોય છે (દા.ત. રીઅલ-ટાઇમ RT-PCR).
Aઅરજી
આ ઉત્પાદનનો ઉપયોગ કોઈપણ પ્રયોગમાં વ્યાપકપણે થઈ શકે છે જ્યાં RNA અધોગતિ ટાળવા માટે RNase હસ્તક્ષેપ શક્ય હોય, જેમ કે:
1.પ્રથમ-સ્ટ્રેન્ડ cDNA સંશ્લેષણ, RT-PCR, RT-qPCR, વગેરે;
2. ઇન-વિટ્રો ટ્રાન્સક્રિપ્શન/અનુવાદ (દા.ત. વિટ્રોમાં વાયરલ પ્રતિકૃતિ) માં અધોગતિથી આરએનએને સુરક્ષિત કરો;
3.આરએનએ અલગતા અને શુદ્ધિકરણ દરમિયાન RNase પ્રવૃત્તિનું નિષેધ.
સંગ્રહ શરતો
-25～-15℃ પર સ્ટોર કરો;
ફ્રીઝ-થૉ ચક્ર ≤ 5 વખત;
1 વર્ષ માટે માન્ય.
એકમની વ્યાખ્યા
એક એકમને RNase A ના 5 ng ની પ્રવૃત્તિને 50% દ્વારા રોકવા માટે જરૂરી RNase અવરોધકની માત્રા તરીકે વ્યાખ્યાયિત કરવામાં આવે છે.
મોલેક્યુલર વજન
RNase ઇન્હિબિટર (ગ્લિસરોલ-ફ્રી) એ 50 kDa પ્રોટીન છે.
ગુણવત્તા નિયંત્રણ
એક્સોનોક્લીઝ પ્રવૃત્તિ:
37°C તાપમાને 16 કલાક માટે 1 μg λ-Hind III ડાયજેસ્ટ ડીએનએ સાથે 40 U એન્ઝાઇમનું સેવન કરવાથી જેલ ઇલેક્ટ્રોફોરેસીસ દ્વારા નિર્ધારિત ડીએનએનું કોઈ શોધી શકાય તેવું અધઃપતન થયું નથી.
એન્ડોન્યુક્લીઝ પ્રવૃત્તિ:
37°C તાપમાને 16 કલાક માટે 1 μg λ DNA સાથે એન્ઝાઇમના 40 U નું સેવન કરવાથી જેલ ઇલેક્ટ્રોફોરેસીસ દ્વારા નિર્ધારિત ડીએનએનું કોઈ શોધી શકાય તેવું અધઃપતન થયું નથી.
નિકિંગ પ્રવૃત્તિ:
37℃ પર 16 કલાક માટે 1 μg pBR322 સાથે 40 U એન્ઝાઇમનું સેવન કરવાથી જેલ ઇલેક્ટ્રોફોરેસીસ દ્વારા નિર્ધારિત ડીએનએનું કોઈ શોધી શકાય તેવું ડિગ્રેડેશન થયું નથી.
RNase પ્રવૃત્તિ:
37℃ પર 4 કલાક માટે 1.6 μg MS2 RNA સાથે 40 U એન્ઝાઇમનું સેવન કરવાથી જેલ ઇલેક્ટ્રોફોરેસીસ દ્વારા નિર્ધારિત આરએનએનું કોઈ શોધી શકાય તેવું અધઃપતન થયું નથી.
E.કોલી ડીએનએ:
TaqMan qPCR દ્વારા 40 U એન્ઝાઇમ શોધી કાઢવામાં આવે છે.E.coli DNA ≤ 0. 1pg/40U છે.
Notes
1. એન્ઝાઇમની નિષ્ક્રિયતાને રોકવા માટે હિંસક રીતે હલાવો અથવા હલાવો નહીં.
2.RNase અવરોધક 25℃ થી 55℃ સુધીના તાપમાને સક્રિય છે અને ≥65℃ પર નિષ્ક્રિય થઈ જાય છે.
3. RNase H, RNase 1 અને RNase T1 ની પ્રવૃત્તિ અટકાવવામાં આવતી નથી.
4. RNase પ્રવૃત્તિને રોકવા માટેની pH શ્રેણી વિશાળ છે (pH 5-9 પર સક્રિય), pH 7-8 પર મહત્તમ પ્રવૃત્તિ દર્શાવે છે.
