Bst 2.0 DNA પોલિમરેઝ (ગ્લિસરોલ મુક્ત)
Bst DNA પોલિમરેઝ V2 એ બેસિલસ સ્ટીરોથર્મોફિલસ DNA પોલિમરેઝ I માંથી ઉતરી આવ્યું છે, જેમાં 5′→3′ DNA પોલિમરેઝ પ્રવૃત્તિ અને મજબૂત સાંકળ રિપ્લેસમેન્ટ પ્રવૃત્તિ છે, પરંતુ 5′→3′ એક્સોનોક્લિઝ પ્રવૃત્તિ નથી.Bst DNA પોલિમરેઝ V2 સ્ટ્રાન્ડ-ડિસ્પ્લેસમેન્ટ, આઇસોથર્મલ એમ્પ્લીફિકેશન LAMP (લૂપ મિડિએટેડ આઇસોથર્મલ એમ્પ્લીફિકેશન) અને ઝડપી સિક્વન્સિંગ માટે આદર્શ રીતે યોગ્ય છે.
ઘટકો
| ઘટક | HC5005A-01 | HC5005A-02 | HC5005A-03 |
| BstDNAપોલિમરેઝ V2(ગ્લિસરોલ-ફ્રી)(8U/μL) | 0.2 એમએલ | 1 એમએલ | 10 એમએલ |
| 10×HC Bst V2 બફર | 1.5 એમએલ | 2×1.5 એમએલ | 3×10 એમએલ |
| MgSO4(100 એમએમ) | 1.5 એમએલ | 2×1.5 એમએલ | 2×10 એમએલ |
અરજીઓ
1.LAMP આઇસોથર્મલ એમ્પ્લીફિકેશન
2.DNA સ્ટ્રાન્ડ સિંગલ ડિસ્પ્લેસમેન્ટ પ્રતિક્રિયા
3.ઉચ્ચ GC જનીન સિક્વન્સિંગ
4. નેનોગ્રામ સ્તરની ડીએનએ સિક્વન્સિંગ.
સંગ્રહ સ્થિતિ
0°C થી નીચે પરિવહન અને -25°C~-15°C પર સંગ્રહિત કરવું.
એકમ વ્યાખ્યા
એક એકમ એ એન્ઝાઇમના જથ્થા તરીકે વ્યાખ્યાયિત કરવામાં આવે છે જે 65 ડિગ્રી સેલ્સિયસ પર 30 મિનિટમાં એસિડ અદ્રાવ્ય સામગ્રીમાં 25 nmol dNTP નો સમાવેશ કરે છે.
ગુણવત્તા નિયંત્રણ
1.પ્રોટીન શુદ્ધતા એસે (SDS-PAGE):Bst DNA પોલિમરેઝ V2 ની શુદ્ધતા ≥99% Coomassie Blue ડિટેક્શનનો ઉપયોગ કરીને SDS-PAGE વિશ્લેષણ દ્વારા નક્કી કરવામાં આવે છે.
2.Exonuclease પ્રવૃત્તિ:1 μg λ -હિંદ Ⅲ ડાયજેસ્ટ ડીએનએ સાથે 37 ℃ પર 16 કલાક માટે Bst DNA પોલિમરેઝ V2 નું ન્યૂનતમ 8 U ધરાવતી 50 μL પ્રતિક્રિયાનું સેવન કરવાથી નિર્ધારિત મુજબ કોઈ શોધી શકાય તેવું અધઃપતન થતું નથી.
3.નિકાસ પ્રવૃત્તિ:37°C તાપમાને 16 કલાક માટે 1 μg pBR322 DNA સાથે Bst DNA પોલિમરેઝ V2 નું ન્યૂનતમ 8 U ધરાવતી 50 μL પ્રતિક્રિયાના સેવનથી નિર્ધારિત મુજબ કોઈ શોધી શકાય તેવું અધોગતિ નથી.
4.RNase પ્રવૃત્તિ:1.6 μg MS2 RNA સાથે 37°C તાપમાને 16 કલાક માટે Bst DNA પોલિમરેઝ V2 નું ન્યૂનતમ 8 U ધરાવતી 50 μL પ્રતિક્રિયાનું સેવન કરવાથી નિર્ધારિત મુજબ કોઈ શોધી શકાય તેવું અધોગતિ થતું નથી.
5.ઇ. કોલી ડીએનએ:Bst DNA પોલિમરેઝ V2 નું 120 U E. coli 16S rRNA લોકસ માટે વિશિષ્ટ પ્રાઇમર્સ સાથે TaqMan qPCR નો ઉપયોગ કરીને E. coli જીનોમિક ડીએનએની હાજરી માટે તપાસવામાં આવે છે.ઇ. કોલી જીનોમિક ડીએનએ દૂષણ ≤1 નકલ છે.
LAMP પ્રતિક્રિયા
| ઘટકો | 25μL |
| 10×HC Bst V2 બફર | 2.5 μL |
| MgSO4 (100 એમએમ) | 1.5 μL |
| dNTPs (દરેક 10 એમએમ) | 3.5 μL |
| SYTO™ 16 લીલો (25×)a | 1.0 μL |
| પ્રાઈમર મિશ્રણb | 6 μL |
| Bst DNA પોલિમરેઝ V2 (ગ્લિસરોલ-ફ્રી) (8 U/uL) | 1 μL |
| ઢાંચો | × μL |
| ddH₂O | 25 μL સુધી |
નોંધો:
1) એ.SYTOTM 16 ગ્રીન (25×): પ્રાયોગિક જરૂરિયાતો અનુસાર, અન્ય રંગોનો અવેજી તરીકે ઉપયોગ કરી શકાય છે;
2) બી.પ્રાઈમર મિક્સ: 20 µ M FIP, 20 µ M BIP, 2.5 µ M F3, 2.5 µ M B3, 5 µ M LF, 5 µ M LB અને અન્ય વોલ્યુમોના મિશ્રણ દ્વારા મેળવવામાં આવે છે.
પ્રતિક્રિયા અને સ્થિતિ
1 × HC Bst V2 બફર, ઇન્ક્યુબેશન તાપમાન 60°C અને 65°C ની વચ્ચે છે.
ગરમી નિષ્ક્રિયતા
80 °C, 20 મિનિટ
