પ્રોટીનનેઝ કે એનજીએસ (પાવડર)
કેટ નંબર: HC4507A
NGS પ્રોટીઝ K એ ઉચ્ચ એન્ઝાઇમ પ્રવૃત્તિ અને વિશાળ સબસ્ટ્રેટ વિશિષ્ટતા સાથે સ્થિર સેરીન પ્રોટીઝ છે. એન્ઝાઇમ પ્રાધાન્યરૂપે હાઇડ્રોફોબિક એમિનો એસિડ, સલ્ફર ધરાવતા એમિનો એસિડ અને સુગંધિત એમિનો એસિડના સી-ટર્મિનલને અડીને આવેલા એસ્ટર બોન્ડ અને પેપ્ટાઇડ બોન્ડને વિઘટિત કરે છે.તેથી, તેનો ઉપયોગ પ્રોટીનને ટૂંકા પેપ્ટાઈડ્સમાં અધોગતિ કરવા માટે થાય છે.NGS પ્રોટીઝ K એ એએસપી સાથેની લાક્ષણિક સેરીન પ્રોટીઝ છે39-તેના69-સેર224ઉત્પ્રેરક ટ્રાયડ જે સેરીન પ્રોટીઝ માટે અનન્ય છે, અને ઉત્પ્રેરક કેન્દ્ર ટો Ca દ્વારા ઘેરાયેલું છે2+સ્થિરીકરણ માટે બંધનકર્તા સાઇટ્સ, શરતોની વિશાળ શ્રેણી હેઠળ ઉચ્ચ એન્ઝાઇમ પ્રવૃત્તિ જાળવી રાખે છે.
સ્પષ્ટીકરણ
| દેખાવ | સફેદ થી ઓફ-વ્હાઈટ આકારહીન પાવડર, lyophilized |
| ચોક્કસ પ્રવૃત્તિ | ≥40U/mg ઘન |
| DNase | કંઈ મળ્યું નથી |
| RNase | કંઈ મળ્યું નથી |
| બાયોબર્ડન | ≤50CFU/g ઘન |
| ન્યુક્લિક એસિડ અવશેષો | <5pg/mg ઘન |
ગુણધર્મો
| સ્ત્રોત | ટ્રિટિરાચિયમ આલ્બમ |
| EC નંબર | 3.4.21.64(ટ્રીટીરાચિયમ આલ્બમમાંથી રીકોમ્બિનન્ટ) |
| મોલેક્યુલર વજન | 29kDa (SDS-PAGE) |
| આઇસોઇલેક્ટ્રિક પોઇન્ટ | 7.81 ફિગ.1 |
| શ્રેષ્ઠ પીએચ | 7.0-12.0 (બધા ઉચ્ચ પ્રવૃત્તિ કરે છે) ફિગ.2 |
| શ્રેષ્ઠ તાપમાન | 65℃ ફિગ.3 |
| pH સ્થિરતા | pH 4.5-12.5 (25℃,16h) ફિગ.4 |
| થર્મલ સ્થિરતા | 50℃ નીચે (pH 8.0, 30min) Fig.5 |
| સંગ્રહ સ્થિરતા | 12 મહિના માટે 25℃ પર સંગ્રહિત Fig.6 |
| એક્ટિવેટર્સ | એસડીએસ, યુરિયા |
| અવરોધકો | ડાયસોપ્રોપીલ ફ્લોરોફોસ્ફેટ;બેન્ઝિલસલ્ફોનીલ ફલોરાઇડ |
સંગ્રહ શરતો
લાયોફિલાઇઝ્ડ પાવડરને -25~-15 ℃ પર લાંબો સમય પ્રકાશથી દૂર રાખો;વિસર્જન પછી, પ્રકાશથી દૂર 2-8℃ પર ટૂંકા ગાળાના સ્ટોરેજ માટે યોગ્ય વોલ્યુમમાં અલિક્વોટ અથવા પ્રકાશથી દૂર -25~-15℃ પર લાંબા ગાળાના સ્ટોરેજ.
સાવચેતીનાં પગલાં
ઉપયોગ કરતી વખતે અથવા વજન કરતી વખતે રક્ષણાત્મક મોજા અને ગોગલ્સ પહેરો અને ઉપયોગ કર્યા પછી સારી રીતે હવાની અવરજવર રાખો.આ ઉત્પાદન ત્વચાની એલર્જીક પ્રતિક્રિયા અને ગંભીર આંખની બળતરાનું કારણ બની શકે છે.જો શ્વાસ લેવામાં આવે, તો તે એલર્જી અથવા અસ્થમાના લક્ષણો અથવા ડિસ્પેનિયાનું કારણ બની શકે છે.શ્વાસોશ્વાસની બળતરા થઈ શકે છે.
એકમની વ્યાખ્યા
NGS Protease K નું એક એકમ પ્રમાણભૂત નિર્ધારણ શરતો હેઠળ કેસીનને 1 μmol L-tyrosine માં હાઇડ્રોલાઈઝ કરવા માટે જરૂરી એન્ઝાઇમની માત્રા તરીકે વ્યાખ્યાયિત કરવામાં આવે છે.
રીએજન્ટ્સની તૈયારી
| રીએજન્ટ | ઉત્પાદક | કેટલોગ |
| કેસીન તકનીકીબોવાઇન દૂધમાંથી | સિગ્મા એલ્ડ્રિચ | C7078 |
| NaOH | સિનોફાર્મ કેમિકલરીએજન્ટ કો., લિ. | 10019762 |
| NaH2PO4·2એચ2O | સિનોફાર્મ કેમિકલરીએજન્ટ કો., લિ. | 20040718 |
| Na2HPO4 | સિનોફાર્મ કેમિકલરીએજન્ટ કો., લિ. | 20040618 |
| ટ્રાઇક્લોરોએસેટિક એસિડ | સિનોફાર્મ કેમિકલરીએજન્ટ કો., લિ. | 80132618 |
| સોડિયમ એસિટેટ | સિનોફાર્મ કેમિકલરીએજન્ટ કો., લિ. | 10018818 |
| એસિટિક એસિડ | સિનોફાર્મ કેમિકલરીએજન્ટ કો., લિ. | 10000218 |
| HCl | સિનોફાર્મ કેમિકલરીએજન્ટ કો., લિ. | 10011018 |
| સોડિયમ કાર્બોનેટ | સિનોફાર્મ કેમિકલરીએજન્ટ કો., લિ. | 10019260 |
| ફોલિન-ફિનોલ | સાંગોન બાયોટેક (શાંઘાઈ)કો., લિ. | A500467-0100 |
| એલ-ટાયરોસિન | સિગ્મા | 93829 છે |
રીએજન્ટ I:
સબસ્ટ્રેટ: બોવાઇન મિલ્ક સોલ્યુશનમાંથી 1% કેસીન: 0.1M સોડિયમ ફોસ્ફેટ સોલ્યુશન, pH 8.0 ના 50ml માં 1g બોવાઇન મિલ્ક કેસિન ઓગાળો, 15 મિનિટ માટે 65-70 °C પર પાણીના સ્નાનમાં ગરમ કરો, હલાવો અને ઓગાળી લો, પાણીથી ઠંડુ કરો, આના દ્વારા સમાયોજિત કરો. સોડિયમ હાઇડ્રોક્સાઇડને pH 8.0, અને 100ml માં પાતળું કરો.
રીએજન્ટ II:
TCA સોલ્યુશન: 0.1M ટ્રાઇક્લોરોએસેટિક એસિડ, 0.2M સોડિયમ એસિટેટ અને 0.3M એસિટિક એસિડ (વજન 1.64g ટ્રાઇક્લોરોએસેટિક એસિડ + 1.64g સોડિયમ એસિટેટ + 1.724mL એસિટિક એસિડ ક્રમિક, 50mL ડીયોનાઇઝ્ડ પાણી ઉમેરો, HC30 સાથે pH30 માં એડજસ્ટ કરો. 100ml).
રીએજન્ટ III:
0.4m સોડિયમ કાર્બોનેટ સોલ્યુશન (4.24g નિર્જળ સોડિયમ કાર્બોનેટનું વજન અને 100mL પાણીમાં ભળે છે)
રીએજન્ટ IV:
ફોલિન ફિનોલ રીએજન્ટ: ડીયોનાઇઝ્ડ પાણીથી 5 વખત પાતળું કરો.
રીએજન્ટ વી:
એન્ઝાઇમ મંદ: 0.1 M સોડિયમ ફોસ્ફેટ સોલ્યુશન, pH 8.0.
રીએજન્ટ VI:
L-ટાયરોસિન પ્રમાણભૂત ઉકેલ:0, 0.005, 0.025, 0.05, 0.075, 0.1, 0.25 umol/ml L-tyrosine 0.2M HCl સાથે ઓગળેલું.
પ્રક્રિયા
1. UV-Vis સ્પેક્ટ્રોફોટોમીટર ચાલુ કરો અને ફોટોમેટ્રિક માપ પસંદ કરો.
2. તરંગલંબાઇ 660nm તરીકે સેટ કરો.
3. વોટર બાથ ચાલુ કરો, તાપમાન 37℃ પર સેટ કરો, 3-5 મિનિટ માટે તાપમાન યથાવત રહે તેની ખાતરી કરો.
4. 0.5mL સબસ્ટ્રેટને 2mL સેન્ટ્રીફ્યુજ ટ્યુબમાં 37℃ વોટર બાથમાં 10 મિનિટ માટે પ્રીહિટ કરો.
5. 10 મિનિટ માટે પ્રીહિટેડ સેન્ટ્રીફ્યુજ ટ્યુબમાં 0.5mL પાતળું એન્ઝાઇમ દ્રાવણ કાઢો.એન્ઝાઇમ મંદને ખાલી જૂથ તરીકે સેટ કરો.
6. પ્રતિક્રિયા પછી તરત જ 1.0 mL TCA રીએજન્ટ ઉમેરો.સારી રીતે મિક્સ કરો અને પાણીના સ્નાનમાં 30 મિનિટ સુધી સેવન કરો.
7. સેન્ટ્રીફ્યુગેટ પ્રતિક્રિયા ઉકેલ.
8. ઉલ્લેખિત ક્રમમાં નીચેના ઘટકો ઉમેરો.
| રીએજન્ટ | વોલ્યુમ |
| સુપરનેટન્ટ | 0.5 એમએલ |
| 0.4M સોડિયમ કાર્બોનેટ | 2.5 એમએલ |
| ફોલિન ફિનોલ રીએજન્ટ | 0.5 એમએલ |
9. પાણીના સ્નાનમાં 30 મિનિટ માટે 37 ° સે સેવન કરતા પહેલા સારી રીતે મિક્સ કરો.
10. OD660OD તરીકે નક્કી કરવામાં આવ્યું હતું1;ખાલી નિયંત્રણ જૂથ: એન્ઝાઇમ મંદનનો ઉપયોગ OD નક્કી કરવા માટે એન્ઝાઇમ સોલ્યુશનને બદલવા માટે થાય છે660OD તરીકે2, ΔOD=OD1-ઓડી2.
11. L-ટાયરોસિન પ્રમાણભૂત વળાંક: 0.5mL વિવિધ સાંદ્રતા L-ટાયરોસિન સોલ્યુશન, 2.5mL 0.4M સોડિયમ કાર્બોનેટ, 5mL સેન્ટ્રીફ્યુજ ટ્યુબમાં 0.5mL ફોલિન ફિનોલ રીએજન્ટ, 30 મિનિટ માટે 37℃ માં ઇન્ક્યુબેટ કરો, OD માટે શોધો660એલ-ટાયરોસીનની વિવિધ સાંદ્રતા માટે, પછી પ્રમાણભૂત વળાંક Y=kX+b મેળવ્યો, જ્યાં Y એ L-ટાયરોસિન સાંદ્રતા છે, X એ OD છે600.
ગણતરી
2: પ્રતિક્રિયા ઉકેલની કુલ માત્રા (mL)
0.5: એન્ઝાઇમ સોલ્યુશનનું પ્રમાણ (એમએલ)
0.5: ક્રોમોજેનિક નિર્ધારણ (mL) માં વપરાયેલ પ્રતિક્રિયા પ્રવાહી વોલ્યુમ
10: પ્રતિક્રિયા સમય (મિનિટ)
Df: મંદન બહુવિધ
C: એન્ઝાઇમ સાંદ્રતા (mg/mL)
આંકડા
Fig.1 DNA અવશેષો
| નમૂના | એવ C4 | ન્યૂક્લિક તેજાબ પુનઃપ્રાપ્તિ(pg/mg) | પુન: પ્રાપ્તિ(%) | કુલ ન્યુક્લિક તેજાબ ( pg/mg) |
| પીઆરકે | 24.66 | 2.23 | 83% | 2.687 |
| PRK+STD2 | 18.723 | 126.728 | - | - |
| STD1 | 12.955 છે |
- |
- |
- |
| STD2 | 16 | |||
| STD3 | 19.125 | |||
| STD4 | 23.135 | |||
| STD5 | 26.625 | |||
| RNA-મુક્ત H2O | અનિશ્ચિત | - | - | - |
ફિગ.2 શ્રેષ્ઠ pH
Fig.3 શ્રેષ્ઠ તાપમાન
Fig.4 pH સ્થિરતા
Fig.5 થર્મલ સ્થિરતા
Fig.6 25℃ પર સંગ્રહ સ્થિરતા
