2×સેન્સી ડાયરેક્ટ પ્રિમિક્સ-યુએનજી (પ્રોબ qPCR)
કેટ નંબર: HCB5151A
SensiDirect Premix-UNG (પ્રોબ qPCR) ડીએનએ નિષ્કર્ષણ અથવા નમૂનાની તૈયારી વિના નમૂનાઓમાંથી સીધા જ પીસીઆર કરવા માટે રચાયેલ છે.આ રીએજન્ટમાં હોટ-સ્ટાર્ટ ડીએનએ પોલિમરેઝ, યુરેસિલ ડીએનએ ગ્લાયકોસીલેઝ (યુએનજી), આરનેઝ ઇન્હિબિટર, એમજીસીએલનો સમાવેશ થાય છે.2, dNTPs (dTTP ને બદલે dUTP સાથે), અને સ્ટેબિલાઇઝર્સ, માત્રાત્મક PCR (qPCR) માટે.આ રીએજન્ટ ઉચ્ચ અવરોધક-સહિષ્ણુતાનું પ્રીફોર્મ કરે છે, અને આ રીતે તે ડીએનએ નિષ્કર્ષણ વિના ગળાના સ્વેબ, લાળ, એન્ટિ-કોગ્યુલેટેડ આખા રક્ત, પ્લાઝ્મા અને સીરમ જેવા નમૂનાઓની તપાસ પર સીધા જ લાગુ કરી શકાય છે.રીએજન્ટ એન્ટી-ઇન્હિબિટરી ડીએનએ પોલિમરેઝ અને યુએનજી એન્ઝાઇમના મિશ્ર ઉત્સેચકો સાથે qPCR માટે માલિકીના બફરનો ઉપયોગ કરે છે.તેથી, તે અવરોધકો ધરાવતા નમૂનાઓમાં લક્ષ્ય જનીનોનું સારું એમ્પ્લીફિકેશન મેળવી શકે છે અને PCR શેષ અને એરોસોલ પ્રદૂષણને કારણે થતા ખોટા હકારાત્મક એમ્પ્લીફિકેશનને અટકાવી શકે છે.આ રીએજન્ટ મોટાભાગના ફ્લોરોસન્ટ જથ્થાત્મક પીસીઆર સાધનો સાથે સુસંગત છે, જેમ કે એપ્લાઇડ બાયોસિસ્ટમ્સ, એપેન્ડોર્ફ, બાયો-રેડ, રોચે અને તેથી વધુ.
ઘટકો
1. 50×સેન્સિડાયરેક્ટ એન્ઝાઇમ/યુએનજી મિક્સ
2. 2×SensiDirect પ્રીમિક્સ બફર (dUTP)
સંગ્રહ શરતો
બધા ઘટકોને લાંબા ગાળાના સ્ટોરેજ માટે -20℃ અને 3 મહિના સુધી 4℃ પર રાખવા જોઈએ.મહેરબાની કરીને ઉપયોગ કરતા પહેલા પીગળ્યા પછી અને સેન્ટ્રીફ્યુજ પછી સારી રીતે મિક્સ કરો.વારંવાર ફ્રીઝ-થૉ ટાળો.
સાયકલિંગ પ્રોટોકોલ
| પગલું | તાપમાન | સમય | સાયકલ |
| પાચન | 50℃ | 2 મિનિટ | 1 |
| પોલિમરેઝ સક્રિયકરણ | 95℃ | 1-5 મિનિટ | 1 |
| ડેનેચર | 95℃ | 10-20 સે | 40-50 |
| એનીલિંગ/એક્સ્ટેંશન | 56-64℃ | 20-60 |
પાઇપિંગ સૂચનાઓ
| રીએજન્ટ | વોલ્યુમ દીઠ પ્રતિક્રિયા | પ્રતિક્રિયા દીઠ વોલ્યુમ | અંતિમ એકાગ્રતા |
| 2×SensiDirect પ્રીમિક્સ બફર (dUTP) | 12.5µL | 25µL | 1× |
| 50×સેન્સિડાયરેક્ટ એન્ઝાઇમ/યુએનજી મિક્સ | 0.5µL | 1µL | 1× |
| 25×પ્રાઇમર-પ્રોબ મિક્સ1, 2 | 1µL | 2µL | 1× |
| નમૂના3, 4 | - | - | - |
| ડીડીએચ2O | - | - | - |
| કુલ વોલ્યુમ | 25 μL | 50 μL | - |
1. પ્રાઈમરની અંતિમ સાંદ્રતા સામાન્ય રીતે 0.2μM છે.વધુ સારા પરિણામો માટે, પ્રાઈમર સાંદ્રતાને 0.2-1μM ની રેન્જમાં ઑપ્ટિમાઇઝ કરી શકાય છે.
2. સામાન્ય રીતે, ચકાસણી સાંદ્રતા 0.1-0.3μM ની રેન્જમાં ઑપ્ટિમાઇઝ કરી શકાય છે.પ્રોબની શ્રેષ્ઠ સાંદ્રતા વાસ્તવિક સમયના પીસીઆર એમ્પ્લીફિકેશન ઇન્સ્ટ્રુમેન્ટ, પ્રોબના પ્રકાર અને ફ્લોરોસન્ટ લેબલીંગ પદાર્થના પ્રકાર સાથે સંબંધિત છે.કૃપા કરીને ઇન્સ્ટ્રુમેન્ટ મેન્યુઅલ અથવા દરેક ફ્લોરોસન્ટ પ્રોબની ચોક્કસ જરૂરિયાતોનો સંદર્ભ લો.
3. વિવિધ પ્રકારના નમૂનાઓમાં વિવિધ પ્રકારો અને અવરોધકની સામગ્રી અને લક્ષ્ય જનીનની નકલ સંખ્યા હોય છે.નમૂનાનું પ્રમાણ વાસ્તવિક સ્થિતિ દ્વારા ધ્યાનમાં લેવું જોઈએ.જો જરૂરી હોય તો, ન્યુક્લિઝ-મુક્ત પાણી અથવા TE બફર ઉમેરીને નમૂનાને પાતળું કરો.
4. વિવિધ નમૂનાઓની ભલામણ કરેલ વોલ્યુમ:
| નમૂના | એક 50 માટે વોલ્યુમ μL પ્રતિક્રિયા | મહત્તમ ગુણોત્તર |
| એન્ટિકોએગ્યુલેટેડ આખા રક્ત | 2.5 μL | 5% |
| પ્લાઝમા | 15 μL | 30% |
| સીરમ | 10 μL | 20% |
| ગળામાં સ્વેબ | 10 μL | 20% |
| લાળ | 10 μL | 20% |
ગુણવત્તા નિયંત્રણ
1. કાર્ય શોધ: qPCR ની સંવેદનશીલતા, વિશિષ્ટતા અને પુનરાવર્તિતતા.
2. કોઈ એક્સોજેનસ ન્યુક્લિઝ પ્રવૃત્તિ નથી: કોઈ એક્સોજેનસ એન્ડોન્યુક્લિઝ અને એક્સોન્યુક્લિઝ પ્રદૂષણ નથી.
ઉત્પાદનની નોંધો
1. આ પ્રોડક્ટ નવલકથા પ્રકારના હોટ-સ્ટાર્ટ ડીએનએ પોલિમરેઝને રોજગારી આપે છે, જે 1-5 મિનિટમાં સક્રિય થઈ શકે છે. તેનું રિએક્શન બફર ઑપ્ટિમાઇઝ કરવામાં આવ્યું હોવાથી, તે પ્રોબ પદ્ધતિનો ઉપયોગ કરીને ડબલ અથવા મલ્ટિપલ ફ્લોરોસેન્સ જથ્થાત્મક PCR માટે વધુ યોગ્ય છે.
2. જો પીસીઆર એમ્પ્લીફિકેશનનું આરએન મૂલ્ય ખૂબ ઓછું હોય અથવા એમ્પ્લીફિકેશન દેખીતી રીતે અવરોધિત હોય, તો નમૂનાની માત્રામાં ઘટાડો, પ્રતિક્રિયાના જથ્થામાં વધારો અથવા નમૂનાના અગાઉના મંદન પરિણામોમાં સુધારો કરી શકે છે.
3. લોહી, લાળ, પેશાબ, ગળાના સ્વેબ વગેરેના સંગ્રહમાં ક્લિનિકલ માપદંડની આવશ્યકતાઓને અનુસરવી જોઈએ, અને ન્યુક્લિક એસિડના અધોગતિને રોકવા માટે તાજા નમૂનાનો ઉપયોગ કરી શકાય છે.
4. અલગ-અલગ એમ્પ્લિકોન્સમાં dUTP અને UNG પ્રત્યે સંવેદનશીલતા માટે અલગ ઉપયોગ કાર્યક્ષમતા હોવાથી, જો UNG સિસ્ટમનો ઉપયોગ કરતી વખતે તપાસ સંવેદનશીલતા ઘટે તો રીએજન્ટ્સને ઑપ્ટિમાઇઝ કરવા જોઈએ.જો જરૂરી હોય તો તકનીકી સપોર્ટ માટે કૃપા કરીને અમારો સંપર્ક કરો.
5. એક-પગલાની પ્રતિક્રિયાઓ વચ્ચે કેરીઓવર પીસીઆર ઉત્પાદનોના એમ્પ્લીફિકેશનને ટાળવા માટે, એમ્પ્લીફિકેશન માટે સમર્પિત પ્રાયોગિક વિસ્તાર અને પીપેટ જરૂરી છે.ગ્લોવ્સ વડે ચલાવો અને વારંવાર બદલો અને PCR એમ્પ્લીફિકેશન પછી રિએક્શન ટ્યુબ ખોલશો નહીં.
