યુનિવર્સલ SYBR GREEN qPCR પ્રીમિક્સ (બ્લુ)

કેટ નંબર: HCB5041B

યુનિવર્સલ બ્લુ qPCR માસ્ટર મિક્સ (ડાઈ આધારિત) એ 2×રીઅલ-ટાઇમ જથ્થાત્મક PCR એમ્પ્લીફિકેશન માટેનું પ્રી-સોલ્યુશન છે જે ઉચ્ચ સંવેદનશીલતા અને વિશિષ્ટતા દ્વારા વર્ગીકૃત થયેલ છે, તે વાદળી રંગનું છે, અને તેમાં નમૂના ઉમેરવાની અસર છે.મુખ્ય ઘટક Taq DNA પોલિમરેઝ નમૂનાની તૈયારી દરમિયાન પ્રાઈમર એનિલિંગને કારણે બિન-વિશિષ્ટ એમ્પ્લીફિકેશનને અસરકારક રીતે રોકવા માટે એન્ટિબોડી હોટ સ્ટાર્ટનો ઉપયોગ કરે છે.તે જ સમયે, સૂત્ર PCR પ્રતિક્રિયાની એમ્પ્લીફિકેશન કાર્યક્ષમતામાં સુધારો કરવા અને વિવિધ GC સમાવિષ્ટો (30 ~ 70%) સાથે જનીનોના એમ્પ્લીફિકેશનને સમાન બનાવવા પ્રોત્સાહન આપતા પરિબળોને ઉમેરે છે, જેથી માત્રાત્મક PCR વ્યાપક જથ્થાત્મકમાં સારો રેખીય સંબંધ મેળવી શકે. પ્રદેશઆ ઉત્પાદનમાં વિશિષ્ટ ROX નિષ્ક્રિય સંદર્ભ ડાય છે, જે મોટાભાગના qPCR સાધનોને લાગુ પડે છે.વિવિધ સાધનો પર ROX ની સાંદ્રતાને સમાયોજિત કરવી જરૂરી નથી.એમ્પ્લીફિકેશન માટે પ્રતિક્રિયા પ્રણાલી તૈયાર કરવા માટે ફક્ત પ્રાઈમર્સ અને ટેમ્પલેટ્સ ઉમેરવા જરૂરી છે.

ઘટકો

યુનિવર્સલ બ્લુ qPCR માસ્ટર મિક્સ

સંગ્રહ શરતો

ઉત્પાદન આઇસ પેક સાથે મોકલવામાં આવે છે અને તેને 18 મહિના માટે -25℃~-15℃ પર સ્ટોર કરી શકાય છે.પ્રતિક્રિયા સિસ્ટમ સંગ્રહિત કરતી વખતે અથવા તૈયાર કરતી વખતે મજબૂત પ્રકાશ ઇરેડિયેશન ટાળવું જરૂરી છે.

સ્પષ્ટીકરણ

સૂચનાઓ

1.પ્રતિક્રિયા પ્રણાલી

[નોંધ]: જોરશોરથી ધ્રુજારીથી વધુ પડતા પરપોટાને ટાળવા માટે ઉપયોગ કરતા પહેલા સારી રીતે મિક્સ કરો.

a) પ્રાઈમર સાંદ્રતા: અંતિમ પ્રાઈમર સાંદ્રતા 0.2μmol/L છે, અને તેને 0.1 અને 1.0μmol/L ની વચ્ચે પણ ગોઠવી શકાય છે.

b) ટેમ્પલેટ એકાગ્રતા: જો ટેમ્પલેટ સીડીએનએ સ્ટોક સોલ્યુશન અનડિલુટેડ હોય, તો વપરાયેલ વોલ્યુમ qPCR પ્રતિક્રિયાના કુલ વોલ્યુમના 1/10 કરતા વધુ ન હોવો જોઈએ.

c) ટેમ્પલેટ ડિલ્યુશન: સીડીએનએ સ્ટોક સોલ્યુશનને 5-10 વખત પાતળું કરવાની ભલામણ કરવામાં આવે છે.એમ્પ્લીફિકેશન દ્વારા મેળવેલ Ct મૂલ્ય 20-30 ચક્ર હોય ત્યારે ઉમેરવામાં આવેલ નમૂનાની શ્રેષ્ઠ માત્રા વધુ સારી છે.

d) પ્રતિક્રિયા પ્રણાલી: લક્ષ્ય જનીન એમ્પ્લીફિકેશનની અસરકારકતા અને પુનરાવર્તિતતાની ખાતરી કરવા માટે 20μL અથવા 50μL નો ઉપયોગ કરવાની ભલામણ કરવામાં આવે છે.

e) સિસ્ટમ તૈયારી: કૃપા કરીને સુપર ક્લીન બેન્ચમાં તૈયાર કરો અને ન્યુક્લિઝ અવશેષો વિના ટીપ્સ અને પ્રતિક્રિયા ટ્યુબનો ઉપયોગ કરો;ફિલ્ટર કારતુસ સાથે ટીપ્સનો ઉપયોગ કરવાની ભલામણ કરવામાં આવે છે.ક્રોસ દૂષણ અને એરોસોલ દૂષણ ટાળો.

2.પ્રતિક્રિયા કાર્યક્રમ

માનક કાર્યક્રમ

ઝડપી કાર્યક્રમ

[નોંધ]: ઝડપી પ્રોગ્રામ મોટાભાગના જનીનો માટે યોગ્ય છે, અને વ્યક્તિગત જટિલ ગૌણ માળખાના જનીનો માટે પ્રમાણભૂત પ્રોગ્રામ્સ અજમાવી શકાય છે.

a) એનિલિંગ તાપમાન અને સમય: કૃપા કરીને પ્રાઈમર અને લક્ષ્ય જનીનની લંબાઈ અનુસાર ગોઠવો.

b) ફ્લોરોસેન્સ સિગ્નલ એક્વિઝિશન (★): કૃપા કરીને સાધનના ઉપયોગ માટેની સૂચનાઓમાં આવશ્યકતાઓ અનુસાર પ્રાયોગિક પ્રક્રિયા સેટ કરો.

c) મેલ્ટિંગ કર્વ: ઇન્સ્ટ્રુમેન્ટ ડિફોલ્ટ પ્રોગ્રામનો સામાન્ય રીતે ઉપયોગ કરી શકાય છે.

3. પરિણામ વિશ્લેષણ 

જથ્થાત્મક પ્રયોગો માટે ઓછામાં ઓછી ત્રણ જૈવિક પ્રતિકૃતિઓ જરૂરી હતી.પ્રતિક્રિયા પછી, એમ્પ્લીફિકેશન વળાંક અને ગલન વળાંકની પુષ્ટિ કરવાની જરૂર છે.

3.1 એમ્પ્લીફિકેશન વળાંક:

પ્રમાણભૂત એમ્પ્લીફિકેશન વળાંક S-આકારનો છે.જ્યારે Ct મૂલ્ય 20 અને 30 ની વચ્ચે આવે ત્યારે જથ્થાત્મક વિશ્લેષણ સૌથી સચોટ હોય છે. જો Ct મૂલ્ય 10 કરતા ઓછું હોય, તો નમૂનાને પાતળું કરવું અને ફરીથી પરીક્ષણ હાથ ધરવું જરૂરી છે.જ્યારે Ct મૂલ્ય 30-35 ની વચ્ચે હોય, ત્યારે ટેમ્પલેટની સાંદ્રતા અથવા પ્રતિક્રિયા પ્રણાલીની માત્રા વધારવી જરૂરી છે, જેથી એમ્પ્લીફિકેશન કાર્યક્ષમતામાં સુધારો કરી શકાય અને પરિણામ વિશ્લેષણની ચોકસાઈની ખાતરી કરી શકાય.જ્યારે Ct મૂલ્ય 35 કરતા વધારે હોય, ત્યારે પરીક્ષણ પરિણામો જનીનની અભિવ્યક્તિનું જથ્થાત્મક વિશ્લેષણ કરી શકતા નથી, પરંતુ ગુણાત્મક વિશ્લેષણ માટે તેનો ઉપયોગ કરી શકાય છે.

3.2 ગલન વળાંક:

ગલન કર્વની એક જ ટોચ સૂચવે છે કે પ્રતિક્રિયાની વિશિષ્ટતા સારી છે અને માત્રાત્મક વિશ્લેષણ કરી શકાય છે;જો મેલ્ટિંગ કર્વ ડબલ અથવા બહુવિધ શિખરો દર્શાવે છે, તો માત્રાત્મક વિશ્લેષણ કરી શકાતું નથી.મેલ્ટિંગ કર્વ ડબલ શિખરો દર્શાવે છે, અને તે નક્કી કરવું જરૂરી છે કે બિન-લક્ષ્ય શિખર પ્રાઈમર ડિમર છે કે ડીએનએ એગેરોઝ જેલ ઇલેક્ટ્રોફોરેસીસ દ્વારા બિન-વિશિષ્ટ એમ્પ્લીફિકેશન છે.જો તે પ્રાઈમર ડિમર હોય, તો પ્રાઈમરની સાંદ્રતા ઘટાડવા અથવા ઉચ્ચ એમ્પ્લીફિકેશન કાર્યક્ષમતા સાથે પ્રાઇમર્સને ફરીથી ડિઝાઇન કરવાની ભલામણ કરવામાં આવે છે.જો તે બિન-વિશિષ્ટ એમ્પ્લીફિકેશન હોય, તો કૃપા કરીને એનિલિંગ તાપમાન વધારો, અથવા વિશિષ્ટતા સાથે પ્રાઇમર્સને ફરીથી ડિઝાઇન કરો.

નોંધો

કૃપા કરીને તમારા સ્વાસ્થ્ય અને સલામતીની ખાતરી કરવા માટે જરૂરી PPE, જેમ કે લેબ કોટ અને મોજા પહેરો！

આ ઉત્પાદન સંશોધન ઉપયોગ માટે જ છે!