મલ્ટિપ્લેક્સ વન સ્ટેપ RT-qPCR પ્રિમિક્સ-UNG
કેટ નંબર: HCB5145A
મલ્ટિપ્લેક્સ વન સ્ટેપ RT-qPCR પ્રોબ કિટ (UDG Plus) એ નમૂના તરીકે RNA પર આધારિત મલ્ટીપ્લેક્સ ક્વોન્ટિટેટિવ PCR કિટ છે.પ્રયોગની પ્રક્રિયામાં, રિવર્સ ટ્રાંસ્ક્રિપ્શન અને જથ્થાત્મક પીસીઆર સમાન ટ્યુબમાં હાથ ધરવામાં આવ્યા હતા, જેણે પ્રાયોગિક કામગીરીને સરળ બનાવી હતી અને દૂષણનું જોખમ ઘટાડ્યું હતું.આ કીટમાં, પ્રથમ સ્ટ્રાન્ડ સીડીએનએ ગરમી-પ્રતિરોધક રિવર્સ ટ્રાન્સક્રિપ્ટેઝ દ્વારા અસરકારક રીતે સંશ્લેષણ કરવામાં આવ્યું હતું અને હોટસ્ટાર્ટ ટેગ ડીએનએ પોલિમરેઝ દ્વારા જથ્થાત્મક રીતે વિસ્તૃત કરવામાં આવ્યું હતું.કીટમાં મુખ્યત્વે ઓપ્ટિમાઇઝ એમપી બફર, એન્ઝાઇમ્સ મિક્સ વગેરેનો સમાવેશ થાય છે. બફર સોલ્યુશનમાં પહેલેથી જ Mg2+અને dNTP.વધુમાં, પરિબળો કે જે બિન-વિશિષ્ટ PCR એમ્પ્લીફિકેશનને અસરકારક રીતે અટકાવી શકે છે અને બહુવિધ qPCR પ્રતિક્રિયાઓની એમ્પ્લીફિકેશન કાર્યક્ષમતામાં સુધારો કરી શકે છે તે ઉમેરવામાં આવે છે, જે એમ્પ્લીફિકેશન કાર્યક્ષમતાને સુનિશ્ચિત કરી શકે છે અને બહુવિધ એમ્પ્લીફિકેશન પ્રતિક્રિયા સુધી લઈ શકે છે.એરોસોલ દૂષણના જોખમને અસરકારક રીતે રોકવા માટે dUTP/UDG સિસ્ટમ ઉમેરવામાં આવી હતી.
ઘટકો
1. બફર
2. એન્ઝાઇમ મિક્સ
સ્પષ્ટીકરણ
| હોટ સ્ટાર્ટ | બિલ્ટ-ઇન હોટ સ્ટાર્ટ |
| તપાસ પદ્ધતિ | પ્રાઈમર-પ્રોબ શોધ |
| પીસીઆર પદ્ધતિ | એક પગલું RT-qPCR |
| પોલિમરેઝ | તાક ડીએનએ પોલિમરેઝ |
| નમૂનાનો પ્રકાર | ડીએનએ |
સંગ્રહ શરતો
ઉત્પાદન સૂકા બરફ સાથે મોકલવામાં આવે છે અને 1 વર્ષ માટે -25~-15℃ પર સંગ્રહિત કરી શકાય છે.તે વારંવાર ટાળવું જોઈએફ્રીઝ-ઓગળવું.તેને અલગથી સાચવવાની ભલામણ કરવામાં આવે છે.
સૂચનાઓ
1.પ્રતિક્રિયા સિસ્ટમ
| ઘટકો | વોલ્યુમ (μL) | અંતિમ એકાગ્રતા |
| 2 × MP બફર | 12.5 | 1× |
| એન્ઝાઇમ મિક્સ | 1 | - |
| પ્રાઈમર/પ્રોબ મિક્સ (2.5 μM) | 3 | 0.3μM |
| ઢાંચો RNA | 1-10 | - |
| RNase ફ્રી H2O | 25 થી | - |
નોંધો:
ઉપયોગ કરતા પહેલા સારી રીતે ભળી જવાની ખાતરી કરો, હિંસક કંપનને કારણે વધુ પડતા પરપોટા ટાળો.
aપ્રાઈમર સાંદ્રતા: મલ્ટિપ્લેક્સ પ્રાઈમર સહિત પ્રાઈમર મિશ્રણ, પરિસ્થિતિના આધારે શ્રેષ્ઠ પ્રાઈમર સાંદ્રતા 0.l અને 1.0μM વચ્ચે હોઈ શકે છે.
bચકાસણી સાંદ્રતા: મલ્ટીપ્લેક્સ પ્રોબ લેબલીંગ તફાવત ફ્લોરોસન્ટ જૂથ સહિત પ્રોબ મિશ્રણ, પરિસ્થિતિના આધારે શ્રેષ્ઠ ચકાસણી સાંદ્રતા 0.05 અને 0.5μM વચ્ચે હોઈ શકે છે.
cટેમ્પલેટ ડિલ્યુશન: qPCR અત્યંત સંવેદનશીલ છે અને ટેમ્પલેટને પાતળું કરવાની ભલામણ કરવામાં આવે છે.નિયંત્રણ Ct મૂલ્ય 20 અને 35 ની વચ્ચે યોગ્ય છે.
ડી.સિસ્ટમની તૈયારી: કૃપા કરીને અલ્ટ્રા ક્લીન વર્કિંગ ટેબલ અને ન્યુક્લિઝ અવશેષો વિના પાઇપટર અને પ્રતિક્રિયા ટ્યુબમાં તૈયાર કરો;ફિલ્ટર તત્વ સાથે ગન હેડનો ઉપયોગ કરવાની ભલામણ કરવામાં આવે છે.ક્રોસ દૂષણ અને એરોસોલ દૂષણ ટાળો.
2. ઑપ્ટિમાઇઝ સાયકલિંગપ્રોટોકોલ
| સાયકલ પગલું | ટેમ્પ. | સમય | સાયકલ |
| રિવર્સ ટ્રાન્સક્રિપ્શન | 50℃a | 20 મિનિટ | 1 |
| પ્રારંભિક-ડિનેચરેશન | 95℃ | 5 મિનિટ | 1 |
| એમ્પ્લીફિકેશન પ્રતિક્રિયા | 95℃ | 15 સે |
40-45 |
| 60℃ b | 30 સે c |
નોંધો:
aરિવર્સ ટ્રાન્સક્રિપ્શન: તાપમાન 42°C અથવા 50°C પસંદ કરી શકે છે.
bએમ્પ્લીફિકેશન પ્રતિક્રિયા: તાપમાન ડિઝાઇન કરેલ પ્રાઇમર્સના Tm મૂલ્ય અનુસાર ગોઠવવામાં આવે છે.
cફ્લોરોસેન્સ સિગ્નલ એક્વિઝિશન:કૃપા કરીને ઇન્સ્ટ્રુમેન્ટ મેન્યુઅલની જરૂરિયાતો અનુસાર પ્રાયોગિક પ્રક્રિયા સેટ કરો.
નોંધો
કૃપા કરીને તમારા સ્વાસ્થ્ય અને સલામતીની ખાતરી કરવા માટે જરૂરી PPE, જેમ કે લેબ કોટ અને મોજા પહેરો.
