પ્રોટીનનેઝ કે એમએનજીએસ (પ્રવાહી)
પ્રોટીનનેઝ K એ વ્યાપક સબસ્ટ્રેટ વિશિષ્ટતા સાથે સ્થિર સેરીન પ્રોટીઝ છે.તે ડિટર્જન્ટની હાજરીમાં પણ મૂળ રાજ્યમાં ઘણા પ્રોટીનને બગાડે છે.ક્રિસ્ટલ અને મોલેક્યુલર સ્ટ્રક્ચરના અભ્યાસોના પુરાવા સૂચવે છે કે એન્ઝાઇમ સક્રિય સાઇટ ઉત્પ્રેરક ટ્રાયડ (Asp39-તેના69-સેર224).ક્લીવેજનું મુખ્ય સ્થળ એલિફેટિક અને એરોમેટિક એમિનો એસિડના કાર્બોક્સિલ જૂથને અડીને પેપ્ટાઇડ બોન્ડ છે જે અવરોધિત આલ્ફા એમિનો જૂથો સાથે છે.તે સામાન્ય રીતે તેની વ્યાપક વિશિષ્ટતા માટે વપરાય છે.આ પ્રોટીનેસ K ખાસ mNGS માટે રચાયેલ છે.અન્ય પ્રોટીનનેઝ K ની સરખામણીમાં, તેમાં સમાન એન્ઝાઈમેટિક પ્રભાવ સાથે ન્યુક્લીક એસિડનું દૂષણ પણ ઓછું છે, જે ડાઉનસ્ટ્રીમ એમએનજીએસ એપ્લિકેશનને વધુ સારી રીતે સુનિશ્ચિત કરી શકે છે.
સંગ્રહ શરતો
2 વર્ષ માટે 2-8℃
સ્પષ્ટીકરણ
| દેખાવ | રંગહીન થી આછો ભુરો પ્રવાહી |
| પ્રવૃત્તિ | ≥800 U/ml |
| પ્રોટીન સાંદ્રતા | ≥20 mg/ml |
| નિકાસે | કંઈ મળ્યું નથી |
| DNase | કંઈ મળ્યું નથી |
| RNase | કંઈ મળ્યું નથી |
ગુણધર્મો
| EC નંબર | 3.4.21.64(ટ્રીટીરાચિયમ આલ્બમમાંથી રીકોમ્બિનન્ટ) |
| આઇસોઇલેક્ટ્રિક પોઇન્ટ | 7.81 |
| શ્રેષ્ઠ પીએચ | 7.0- 12.0 ફિગ. 1 |
| શ્રેષ્ઠ તાપમાન | 65 ℃ ફિગ. 2 |
| pH સ્થિરતા | pH 4.5- 12.5 (25 ℃, 16 h) ફિગ. 3 |
| થર્મલ સ્થિરતા | 50 ℃ નીચે (pH 8.0, 30 મિનિટ) ફિગ. 4 |
| સંગ્રહ સ્થિરતા | 25 ℃ પર 12 મહિના માટે 90% થી વધુ પ્રવૃત્તિ |
| એક્ટિવેટર્સ | એસડીએસ, યુરિયા |
| અવરોધકો | ડાયસોપ્રોપીલ ફ્લોરોફોસ્ફેટ;ફિનાઇલમેથાઇલ સલ્ફોનીલ ફ્લોરાઇડ |
અરજીઓ
1. જિનેટિક ડાયગ્નોસ્ટિક કીટ
2. આરએનએ અને ડીએનએ નિષ્કર્ષણ કિટ્સ
3. પેશીઓમાંથી બિન-પ્રોટીન ઘટકોનું નિષ્કર્ષણ, પ્રોટીન અશુદ્ધિઓનું અધોગતિ, જેમ કે ડીએનએરસીઓ અને હેપરિનની તૈયારી
4. સ્પંદનીય ઇલેક્ટ્રોફોરેસીસ દ્વારા રંગસૂત્ર ડીએનએની તૈયારી
5. પશ્ચિમી ડાઘ
6. વિટ્રો નિદાનમાં એન્ઝાઇમેટિક ગ્લાયકોસાઇલેટેડ આલ્બ્યુમિન રીએજન્ટ્સ
સાવચેતીનાં પગલાં
ઉપયોગ કરતી વખતે અથવા વજન કરતી વખતે રક્ષણાત્મક મોજા અને ગોગલ્સ પહેરો અને ઉપયોગ કર્યા પછી સારી રીતે હવાની અવરજવર રાખો.આ ઉત્પાદન ત્વચાની એલર્જીક પ્રતિક્રિયા અને ગંભીર આંખની બળતરાનું કારણ બની શકે છે.જો શ્વાસ લેવામાં આવે, તો તે એલર્જી અથવા અસ્થમાના લક્ષણો અથવા ડિસ્પેનિયાનું કારણ બની શકે છે.શ્વાસોશ્વાસની બળતરા થઈ શકે છે.
એકમની વ્યાખ્યા
એક એકમ (U) એ 1 μmol ઉત્પન્ન કરવા માટે કેસીનને હાઇડ્રોલાઈઝ કરવા માટે જરૂરી એન્ઝાઇમની માત્રા તરીકે વ્યાખ્યાયિત કરવામાં આવે છે.નીચેની શરતો હેઠળ ટાયરોસિન પ્રતિ મિનિટ.
રીએજન્ટ્સની તૈયારી
રીએજન્ટ I: 1g મિલ્ક કેસીન 0.1M સોડિયમ ફોસ્ફેટ સોલ્યુશન (pH 8.0) ના 50ml માં ઓગળવામાં આવ્યું હતું, 65-70 ℃ પાણીમાં 15 મિનિટ માટે ઉકાળવામાં આવ્યું હતું, હલાવીને ઓગળવામાં આવ્યું હતું, પાણી દ્વારા ઠંડુ કરવામાં આવ્યું હતું, સોડિયમ હાઇડ્રોક્સાઇડ દ્વારા pH 8.0 માં ગોઠવવામાં આવ્યું હતું, અને 100 મિલી.
રીએજન્ટ II: 0.1M ટ્રાઇક્લોરોએસેટિક એસિડ, 0.2M સોડિયમ એસિટેટ, 0.3M એસિટિક એસિડ.
રીએજન્ટ III: 0.4M Na2CO3ઉકેલ
રીએજન્ટ IV: ફોરિન્ટ રીએજન્ટ 5 વખત શુદ્ધ પાણીથી ભળે છે.
રીએજન્ટ V: એન્ઝાઇમ મંદ: 0.1M સોડિયમ ફોસ્ફેટ સોલ્યુશન (pH 8.0).
રીએજન્ટ VI: ટાયરોસિન સોલ્યુશન: 0, 0.005, 0.025, 0.05, 0.075, 0.1, 0.25 umol/ml ટાયરોસિન 0.2 સાથે ઓગળેલુંM HCl.
પ્રક્રિયા
1. રીએજન્ટ I નું 0.5ml 37℃ પર પ્રી-ગરમ થાય છે, તેમાં 0.5ml એન્ઝાઇમ સોલ્યુશન ઉમેરો, સારી રીતે ભળી દો, અને તેને ઉકાળો10 મિનિટ માટે 37℃.
2. પ્રતિક્રિયા રોકવા માટે 1 મિલી રીએજન્ટ II ઉમેરો, સારી રીતે ભળી દો અને 30 મિનિટ સુધી સેવન ચાલુ રાખો.
3. સેન્ટ્રીફ્યુગેટ પ્રતિક્રિયા ઉકેલ.
4. 0.5ml સુપરનેટન્ટ લો, 2.5ml રીએજન્ટ III, 0.5ml રીએજન્ટ IV ઉમેરો, સારી રીતે મિક્સ કરો અને 37℃ તાપમાને પકાવો30 મિનિટ માટે.
5. OD660OD તરીકે નક્કી કરવામાં આવ્યું હતું1;ખાલી નિયંત્રણ જૂથ: 0.5ml રીએજન્ટ V નો ઉપયોગ એન્ઝાઇમ બદલવા માટે થાય છેOD નક્કી કરવા માટેનો ઉકેલ660OD તરીકે2, ΔOD=OD1-ઓડી2.
6. L-ટાયરોસિન પ્રમાણભૂત વળાંક: 0.5mL વિવિધ સાંદ્રતા L-ટાયરોસિન સોલ્યુશન, 2.5mL રીએજન્ટ III, 5mL સેન્ટ્રીફ્યુજ ટ્યુબમાં 0.5mL રીએજન્ટ IV, 30 મિનિટ માટે 37℃ માં ઇન્ક્યુબેટ કરો, OD માટે શોધો660એલ-ટાયરોસીનની વિવિધ સાંદ્રતા માટે, પછી પ્રમાણભૂત વળાંક Y=kX+b મેળવ્યો, જ્યાં Y એ L-ટાયરોસિન સાંદ્રતા છે, X એ OD છે600.
ગણતરી
2: પ્રતિક્રિયા ઉકેલની કુલ માત્રા (mL)
0.5: એન્ઝાઇમ સોલ્યુશનનું પ્રમાણ (એમએલ)
0.5: ક્રોમોજેનિક નિર્ધારણ (mL) માં વપરાયેલ પ્રતિક્રિયા પ્રવાહી વોલ્યુમ
10: પ્રતિક્રિયા સમય (મિનિટ)
Df: મંદન બહુવિધ
C: એન્ઝાઇમ સાંદ્રતા (mg/mL)
સંદર્ભ
1. Wieger U & Hilz H. FEBS Lett.(1972);23:77.
2. વિગર યુ એન્ડ હિલ્ઝ એચ. બાયોકેમ.બાયોફિઝ.રેસ.કોમ્યુન.(1971);44:513.
3. હિલ્ઝ, એચ.વગેરે.,EUR.જે. બાયોકેમ.(1975);56:103–108.
4. સેમબ્રુક જેet અલ., મોલેક્યુલર ક્લોનિંગ: એ લેબોરેટરી મેન્યુઅલ, 2જી આવૃત્તિ, કોલ્ડ સ્પ્રિંગ હાર્બરલેબોરેટરી પ્રેસ, કોલ્ડ સ્પ્રિંગ હાર્બર (1989).
આંકડા
ફિગ.1 શ્રેષ્ઠ pH
100mM બફર સોલ્યુશન:pH6.0-8.0, Na-phosphate;pH8.0-9.0, Tris-HCl;pH9.0-12.5, Glycine-NaOH. એન્ઝાઇમ સાંદ્રતા: 1mg/mL
Fig.2 શ્રેષ્ઠ તાપમાન
20 એમએમ કે-ફોસ્ફેટ બફર pH 8.0 માં પ્રતિક્રિયા.એન્ઝાઇમ સાંદ્રતા: 1 એમજી/એમએલ
Fig.3 pH સ્થિરતા
25 ℃, 50 એમએમ બફર સોલ્યુશન સાથે 16 એચ-સારવાર: પીએચ 4.5- 5.5, એસિટેટ;પીએચ 6.0-8.0, ના-ફોસ્ફેટ;pH 8.0-9.0, Tris-HCl.pH 9.0- 12.5, Glycine-NaOH.એન્ઝાઇમ સાંદ્રતા: 1 એમજી/એમએલ
Fig.4 થર્મલ સ્થિરતા
50 એમએમ ટ્રિસ-એચસીએલ બફર, પીએચ 8.0 સાથે 30 મિનિટ-સારવાર.એન્ઝાઇમ સાંદ્રતા: 1 એમજી/એમએલ
Fig.5 સંગ્રહ સ્થિરતાty at 25℃
