જંગલી તાક ડીએનએ પોલિમરેઝ
તાક ડીએનએ પોલિમરેઝ એ થર્મસ એક્વાટિકસ YT-1 માંથી થર્મોસ્ટેબલ ડીએનએ પોલિમરેઝ છે, જે 5′→3′ પોલિમરેઝ પ્રવૃત્તિ અને 5´ ફ્લૅપ એન્ડોન્યુક્લિઝ પ્રવૃત્તિ ધરાવે છે.
ઘટકો
| ઘટક | HC1010A-01 | HC1010A-02 | HC1010A-03 | HC1010A-04 |
| 10× Taq બફર | 2×1 એમએલ | 2×10 એમએલ | 2×50 એમએલ | 5×200 એમએલ |
| Taq DNA પોલિમરેઝ (5 U/μL) | 0.1 એમએલ | 1 એમએલ | 5 એમએલ | 5×10 એમએલ |
સંગ્રહ સ્થિતિ
0°C થી નીચે પરિવહન અને -25°C~-15°C પર સંગ્રહિત કરવું.
એકમ વ્યાખ્યા
એક એકમ એ એન્ઝાઇમના જથ્થા તરીકે વ્યાખ્યાયિત કરવામાં આવે છે જે 75 ડિગ્રી સેલ્સિયસ પર 30 મિનિટમાં એસિડ અદ્રાવ્ય સામગ્રીમાં 15 nmol dNTP નો સમાવેશ કરે છે.
ગુણવત્તા નિયંત્રણ
1.પ્રોટીન શુદ્ધતા એસે (SDS-PAGE):Taq DNA પોલિમરેઝની શુદ્ધતા SDS-PAGE વિશ્લેષણ દ્વારા ≥95% નક્કી કરવામાં આવી હતી.
2.Endonuclease પ્રવૃત્તિ:37 ℃ પર 16 કલાક માટે 1 μg λDNA સાથે તાક ડીએનએ પોલિમરેઝનું ન્યૂનતમ 5 U, નિર્ધારિત મુજબ કોઈ શોધી શકાય તેવું અધોગતિ નથી.
3.Exonuclease પ્રવૃત્તિ:37 ℃ પર 16 કલાક માટે 1 μg λ -Hind Ⅲ ડાયજેસ્ટ ડીએનએ સાથે ઓછામાં ઓછા 5 U નું Taq DNA પોલિમરેઝ નક્કી કર્યા મુજબ કોઈ શોધી શકાય તેવું અધોગતિ કરતું નથી.
4.નિકાસ પ્રવૃત્તિ:37°C તાપમાને 16 કલાક માટે 1 μg pBR322 DNA સાથે ન્યૂનતમ 5 U ના Taq DNA પોલિમરેઝ, નિર્ધારિત મુજબ કોઈ શોધી શકાય તેવું અધોગતિ નથી.
5.RNase પ્રવૃત્તિ:37°C તાપમાને 16 કલાક માટે 1.6 μg MS2 RNA સાથે ઓછામાં ઓછું 5 U Taq DNA પોલિમરેઝ, નિર્ધારિત મુજબ કોઈ શોધી શકાય તેવું અધોગતિ નથી.
6.ઇ. કોલીડીએનએ:Taq DNA પોલિમરેઝનું 5 U E. coli જિનોમિક DNA ની હાજરી માટે TaqMan qPCR નો ઉપયોગ કરીને E. coli 16S rRNA લોકસ માટે વિશિષ્ટ પ્રાઇમર્સ સાથે તપાસવામાં આવે છે.ઇ. કોલી જીનોમિક ડીએનએ દૂષણ ≤1 નકલ છે.
7.PCR એમ્પ્લીફિકેશન (5.0 kb લેમ્બડા ડીએનએ)- PCR એમ્પ્લીફિકેશનના 25 ચક્ર માટે Taq DNA પોલિમરેઝના 5 એકમો સાથે 5 ng Lambda DNA ધરાવતી 50 μL પ્રતિક્રિયા અપેક્ષિત 5.0 kb ઉત્પાદનમાં પરિણમે છે.
પ્રતિક્રિયા સેટઅપ
| ઘટકો | વોલ્યુમ |
| ટેમ્પલેટ ડીએનએa | વૈકલ્પિક |
| 10 μM ફોરવર્ડ પ્રાઈમર | 1 μL |
| 10 μM રિવર્સ પ્રાઈમર | 1 μL |
| dNTP મિક્સ (10mM દરેક) | 1 μL |
| 10×Taq બફર | 5 μL |
| તાક ડીએનએ પોલિમરેઝb | 0.25 μL |
| ન્યુક્લિઝ-મુક્ત પાણી | 50 μL સુધી |
નોંધો:
1) વિવિધ નમૂનાઓની શ્રેષ્ઠ પ્રતિક્રિયા સાંદ્રતા અલગ છે.નીચેનું કોષ્ટક 50 μL પ્રતિક્રિયા સિસ્ટમનો ભલામણ કરેલ નમૂનાનો ઉપયોગ દર્શાવે છે.
| ડીએનએ | રકમ |
| જીનોમિક | 1 એનજી -1 μg |
| પ્લાઝમિડ અથવા વાયરલ | 1 પૃષ્ઠ-1 એનજી |
2) Taq DNA પોલિમરેઝની શ્રેષ્ઠ સાંદ્રતા વિશિષ્ટ એપ્લિકેશન્સમાં 0.25 µL~1 µL સુધીની હોઈ શકે છે.
પ્રતિક્રિયાકાર્યક્રમ
| પગલું | તાપમાન(°C) | સમય | સાયકલ |
| પ્રારંભિક વિકૃતિકરણa | 95 ℃ | 5 મિનિટ | - |
| વિકૃતિકરણ | 95 ℃ | 15-30 સે | 30-35 સાયકલ |
| એનેલીંગb | 60 ℃ | 15 સે | |
| વિસ્તરણ | 72 ℃ | 1kb/મિનિટ | |
| અંતિમ વિસ્તરણ | 72 ℃ | 5 મિનિટ | - |
નોંધો:
1) પ્રારંભિક વિકૃતિકરણ સ્થિતિ મોટાભાગની એમ્પ્લીફિકેશન પ્રતિક્રિયાઓ માટે યોગ્ય છે અને ટેમ્પલેટ સ્ટ્રક્ચરની જટિલતા અનુસાર સુધારી શકાય છે.જો ટેમ્પલેટનું માળખું જટિલ હોય, તો પ્રારંભિક વિકૃતિકરણ અસરને સુધારવા માટે પૂર્વ-ડિનેચ્યુરેશનનો સમય 5 - 10 મિનિટ સુધી વધારી શકાય છે.
2) પ્રાઈમરના Tm મૂલ્ય અનુસાર એન્નીલિંગ તાપમાનને સમાયોજિત કરવાની જરૂર છે, જે સામાન્ય રીતે પ્રાઈમરના Tm મૂલ્ય કરતાં 3~5 ℃ નીચા પર સેટ કરવામાં આવે છે;જટિલ નમૂનાઓ માટે, કાર્યક્ષમ એમ્પ્લીફિકેશન હાંસલ કરવા માટે એનિલિંગ તાપમાનને સમાયોજિત કરવું અને એક્સ્ટેંશનનો સમય લંબાવવો જરૂરી છે.
